新型葡萄糖氧化酶的基因克

发布时间：2023-01-30 17:17

　　葡萄糖氧化酶（GOX）已广泛应用。目前,除了曲霉和青霉属来源的GOX外,很少有新型GOX被报道。本研究采用平板显色的方法对实验室保存的真菌进行产GOX的筛选,耐寒枝孢菌Cladosporium neopsychrotolerans SL16表达了GOX活性。根据其基因组测序数据,克隆了GOX编码基因CngoxA。另外,根据GOX序列相似性,从枝孢菌C.tianshanense SL19和一株黑曲霉Aspergillus niger MJ5中克隆得到5个可能的GOX基因,分别为CngoxB、AngoxA5、AngoxA7、AngoxA8和AngoxA3。CngoxA和CngoxB编码的蛋白与已报道验证功能的GOX最高一致性为35%,两者间一致性为80%,均为新颖的GOX。AngoxA5编码的蛋白与已验证功能的GOX最高一致性为97%,而AngoxA7、AngoxA8和AngoxA3编码的蛋白与已报到GOX序列相似性约为50-68%。6个基因在毕赤酵母Pichia pastoris中进行表达,只有CngoxA和AngoxA5表达了具有葡萄糖氧化酶活性的蛋白。来源于C.neopsychrot... 

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 葡萄糖氧化酶的结构及催化机理
        1.1.1 葡萄糖氧化酶的结构
        1.1.2 葡萄糖氧化酶的催化机理
    1.2 葡萄糖氧化酶的来源、基因克隆与表达
        1.2.1 来源
        1.2.2 基因克隆与异源表达
    1.3 葡萄糖氧化酶的理化性质
    1.4 葡萄糖氧化酶的分子改良
        1.4.1 葡萄糖氧化酶的固定化研究
        1.4.2 葡萄糖氧化酶的定向进化和理性设计
    1.5 葡萄糖氧化酶的应用前景
        1.5.1 食品工业
        1.5.2 医药和医疗业
        1.5.3 饲料工业
    1.6 问题与展望
        1.6.1 目前的问题
        1.6.2 展望与对策
    1.7 研究内容与方法
    1.8 研究目的与意义
第二章 葡萄糖氧化酶基因的克隆与表达
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 菌株与质粒
        2.1.2 引物合成
        2.1.3 试剂盒、工具酶与生化试剂
        2.1.4 培养基和溶液
        2.1.5 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 产葡萄糖氧化酶菌株的筛选
        2.2.2 葡萄糖氧化酶基因的克隆
        2.2.3 葡萄糖氧化酶异源表达与性质测定
    2.3 结果
        2.3.1 产葡萄糖氧化酶菌株的筛选结果
        2.3.2 葡萄糖氧化酶基因的克隆结果
        2.3.3 葡萄糖氧化酶异源表达与性质测定结果
    2.4 讨论
    本章小结
第三章 枝孢菌来源葡萄糖氧化酶的分子改良
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 菌株与质粒
        3.1.2 引物合成
        3.1.3 试剂盒、工具酶与生化试剂
        3.1.4 培养基、溶液及面包制作材料
        3.1.5 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 序列及结构分析
        3.2.2 突变体表达质粒的构建
        3.2.3 毕赤酵母GS115 感受态的制备与电击转化
        3.2.4 葡萄糖氧化酶阳性转化子的筛选
        3.2.5 葡萄糖氧化酶的摇瓶发酵和纯化
        3.2.6 纯化的葡萄糖氧化酶的性质测定
        3.2.7 基于MD分析CnGOXA和CnGOXA-M1结构
        3.2.8 面包制作流程
    3.3 结果
        3.3.1 序列和结构分析结果
        3.3.2 葡萄糖氧化酶阳性转化子的筛选结果
        3.3.3 葡萄糖氧化酶的摇瓶发酵与纯化结果
        3.3.4 葡萄糖氧化酶的部分酶学性质测定结果
        3.3.5 CnGOXA-M1对面包的影响
        3.3.6 CnGOXB突变体的部分酶学性质测定结果
    3.4 讨论
    本章小结
第四章 全文总结
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物葡萄糖氧化酶的研究进展[J]. 廖兆民,蔡俊,林建国.  食品与发酵工业. 2018(07)
[2]基于融合双亲短肽提高葡萄糖氧化酶的热稳定性[J]. 任春慧,张娟,堵国成,陈坚.  生物工程学报. 2018(07)
[3]基因组的退化[J]. 唐元华.  高科技与产业化. 2017(05)
[4]葡萄糖氧化酶对产蛋后期蛋鸡生产性能的影响[J]. 赵必迁,李学海.  广东饲料. 2016(10)
[5]葡萄糖氧化酶对饲喂含霉变饲料小鼠体重和肠道微生物的影响[J]. 赵艳姣,崔亚利,陈宝江,孙海云,李三吓,李同洲.  动物营养学报. 2014(11)
[6]葡萄糖氧化酶在仔猪上的应用效果研究[J]. 汤海鸥,高秀华,姚斌,李学军,王晓睿.  中国饲料. 2013(19)
[7]葡萄糖氧化酶对断奶仔兔生产性能和免疫器官发育的影响[J]. 吴艳芳,吕景智,戴小丹,任红立,王栋得,李自强,张家骅,王永康.  中国饲料. 2012(14)
[8]葡萄糖氧化酶对仔猪胃肠道微生物区系及血液生化指标的影响[J]. 杨久仙,张荣飞,张金柱,马秋刚,白锦梅,乔立东.  畜牧与兽医. 2011(06)
[9]葡萄糖氧化酶制剂对肉鸡肠道pH及盲肠微生物的影响[J]. 赵国先,宋海彬,马可为,张振红,计成,马秋刚.  河北农业大学学报. 2009(04)

博士论文
[1]极端嗜酸真菌Bispora sp. MEY-1胞外糖苷水解酶类的产酶分析及其相关基因的克隆与表达[D]. 罗会颖.中国农业科学院 2008



本文编号：3733282