单纯疱疹病毒2型UL27和UL29双基因shRNA慢病毒表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

发布时间：2023-02-08 10:13

　　目的构建单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27和UL29双基因shRNA慢病毒表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法针对HSV-2 UL27、UL29基因,各筛选干扰效率最佳的shRNA片段相连接,构建双基因共表达慢病毒载体,并转染HEK293细胞作为干扰组,另设空白对照组(不做任何处理)和阴性对照组(转染不针对任何基因的慢病毒载体)。转染48或24 h后接种HSV-2,RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中目的基因mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测各组细胞的存活率。结果干扰组UL27和UL29基因mRNA的表达抑制率可达(78.61±2.14)%和(84.86±1.52)%,同时gB和ICP8蛋白的相对表达量明显下降(P均<0.05),细胞的存活明显率提高(P均<0.05)。结论构建的HSV-2 UL27、UL29双基因shRNA重组慢病毒表达载体能在HEK293细胞中表达,为后续HSV-2的基因治疗奠定了实验基础。

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒、细胞及载体
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3双基因shR NA重组慢病毒表达载体的构建
    1.4细胞分组及转染
    1.5双基因mR NA在转染细胞中表达的检测
    1.6 双蛋白在转染细胞中表达的检测
    1.7 转染细胞存活率的检测
    1.8 统计学分析
2 结果
    2.1 双基因sh R N A重组慢病毒表达载体的鉴定
    2.2 细胞的转染效率
    2.3 各组细胞的病变情况
    2.4 UL27和UL29基因m R N A在HEK293细胞中的表达
    2.5 g B和ICP8蛋白在HEK293细胞中的表达
    2.6 各组HEK293细胞的存活率
3 讨论



本文编号：3737822