RNA干扰沉默RRS1基因对乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响

发布时间：2023-02-14 16:28

　　目的乳腺癌的发生发展受到多种多样因素的影响,且发病率逐年提高,是目前全球女性发病率最高的恶性肿瘤。乳腺癌的治疗方式仍较为传统和单一,目前分子靶向治疗成为临床研究热点,但是乳腺癌相关生物标志分子和分子靶点仍非常有限。为了筛查出有价值的乳腺癌相关因子,对乳腺癌成对样本信息通过高通量差异表达基因筛选和生物信息分析,成功筛选出一个新的对乳腺癌有重要作用的基因—核糖体合成调控因子(Regulator of Ribosome Synthesis 1,RRS1)。通过检测RRS1基因在人的乳腺正常上皮细胞HMEC和乳腺癌细胞MCF-7中的表达差异,探讨RRS1基因与乳腺癌发生发展的相关性;通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制RRS1的表达后,分析RRS1对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖活力、细胞周期分布、凋亡及迁移能力的影响。方法采用Western blot方法检测RRS1在人乳腺癌细胞MCF-7与正常的人乳腺上皮细胞HMEC中是否存在表达差异;分别构建携带绿色荧光蛋白的sh RNA-RRS1慢病毒和sh RNA-Ctrl RNA阴性对照慢病毒干扰系统,分别感染乳腺癌MCF-7细胞,得到sh RRS1实...

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
引言
材料与方法
    1 实验材料与仪器
        1.1 细胞株及主要试剂
        1.2 仪器
    2 方法
        2.1 细胞培养与冻存
        2.2 siRNA的序列设计
        2.3 慢病毒转染
        2.4 荧光定量PCR检测mRNA表达水平
        2.5 Westernblot检测RRS1蛋白表达水平
        2.6 MTT法检测细胞增殖能力变化
        2.7 细胞周期检测
        2.8 DAPI荧光法检测细胞凋亡
        2.9 AnnexinV-APC单染法测细胞凋亡
        2.10 Caspase3/7试验检测细胞凋亡状况
        2.11 Transwell试验测细胞转移
        2.12 统计学分析
结果
    1 MCF-7与HMEC中RRS1蛋白表达差异检测
    2 细胞转染水平检测
    3 敲减后RRS1基因转录与翻译水平检测
    4 细胞增殖能力检测
    5 流式细胞仪检测细胞周期
    6 荧光染色检测细胞凋亡情况
    7 流式细胞仪法检测细胞凋亡
    8 caspase3/7试验检测细胞凋亡
    9 细胞迁移能力的变化
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢



本文编号：3742615