Mito-cpYFP转基因小鼠脏器氧化还原状态与行为学研究
发布时间：2023-02-15 08:07
大量研究表明,过量的自由基会对机体产生氧化应激损伤,引发一系列疾病,加快衰老。对自由基的追踪方法中,线粒体基质靶向超氧化物指示剂环状排列黄色荧光蛋白探针(Circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)可以实时显示单个线粒体自发爆发超氧化物的生成的方法较为前沿。部分研究者通过构建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠模型研究自由基,但对C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠模型的寿命、氧化还原状态及行为学的研究工作很少有人涉及。本研究对C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的主要脏器通过RT-qPCR技术测定其cpYFP的表达量,并对C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠和野生型小鼠进行寿命、行为学和主要脏器的部分生物标志物的比较,主要研究结果分述如下:(1)C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的主要脏器的cpYFP表达量由多到少依次为肺组织、心组织、脑组织、肝组织、肾组织。(2)与野生型小鼠比较,C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的寿命和记忆力显著的...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 自由基的概述
1.1.1 自由基和活性氧的定义及联系
1.1.2 人体中自由基的种类及来源
1.1.3 自由基与氧化应激
1.1.4 降低自由基的危害
1.2 生物体内的氧自由基研究方法概述
1.2.1 生物体内的氧自由基的产生过程
1.2.2 生物体内的自由基的研究思路
1.2.3 自由基的测定方法
1.3 线粒体环状排列黄色荧光蛋白探针(MITO-CPYFP)的概述
1.3.1 Mito-cpYFP的发现及其探究
1.3.2 Mito-cpYFP的结构
1.3.3 Mito-cpYFP的优势及应用
1.4 C57BL/6-TGH(MITO-CPYFP)小鼠的构建
1.4.1 构建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的意义
1.4.2 C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠构建流程
1.5 反转录定量PCR
1.5.1 SYBR GreenⅠ荧光染料法
1.5.2 相对定量和绝对定量
1.6 寿命期限与氧化应激
1.6.1 衰老与寿命期限
1.6.2 端粒与氧化应激对寿命影响
1.7 动物行为学表型
1.7.1 氧化还原状态与行为学
1.7.2 Mito-cpYFP与行为学
1.8 研究的意义和主要内容
1.8.1 研究意义
1.8.2 本文的主要研究内容
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 小鼠饲料配方
2.1.3 主要材料与试剂
2.1.4 主要仪器和设备
2.2 小鼠MITO-CPYFP的表达量测定
2.2.1 小鼠主要脏器的RNA的提取和测定RNA浓度
2.2.2 小鼠主要脏器组织RNA电泳
2.2.3 RT-PCR反应
2.2.4 Real Time PCR反应
2.2.5 △△Ct法的相对量计算方法
2.3 C57BL/6-TGH(MITO-CPYFP)小鼠的寿命实验方法
2.3.1 实验动物的繁殖及饲养
2.3.2 实验动物的寿命记录
2.4 小鼠行为学实验方法
2.4.1 行为学实验动物的饲养与准备
2.4.2 旷场实验
2.4.3 水迷宫实验
2.4.4 爬杆耐力实验
2.4.5 倾斜平板实验
2.4.6 筑巢实验
2.5 生物标志物测定
2.5.1 生物标志物测定的实验动物
2.5.2 小鼠的脏器指数测定和组织匀浆的制备
2.5.3 BCA蛋白浓度测定
2.5.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定
2.5.5 过氧化氢酶(CAT)测定
2.5.6 总一氧化氮合成酶(T-NOS)测定
2.5.7 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测定
2.5.8 丙二醛(MDA)测定
2.5.9 过氧化氢(H2O2)的测定
2.5.10 超氧阴离子自由基(O2
·-)的测定
2.5.11 氧化还原电位(Eh)的测定
2.6 数据处理和统计分析
第3章 结果与分析
3.1 小鼠的MITO-CPYFP的表达量
3.1.1 野生型及转基因小鼠各组织RNA电泳
3.1.2 野生型及转基因小鼠各组织cpYFP半定量结果
3.1.3 野生型及转基因小鼠各组织cpYFP定量结果
3.2 野生型及转基因小鼠的寿命结果
3.3 野生型及转基因小鼠的行为学实验结果
3.3.1 旷场实验
3.3.2 水迷宫实验
3.3.3 爬杆实验
3.3.4 协调运动能力实验
3.3.5 筑巢实验
3.4 小鼠主要脏器的脏器指数和蛋白浓度测定结果
3.4.1 小鼠的主要脏器的脏器指数测定结果
3.4.2 小鼠的主要脏器的蛋白浓度测定结果
3.5 小鼠主要脏器组织的抗氧化功能的测定结果
3.5.1 小鼠主要脏器组织的过氧化氢酶活力的测定结果
3.5.2 小鼠主要脏器组织的总超氧化物歧化酶活力的测定结果
3.5.3 小鼠主要脏器组织的总一氧化氮合成酶活力的测定结果
3.5.4 小鼠主要脏器组织的谷胱甘肽过氧化氢酶活力的测定结果
3.5.5 小鼠主要脏器组织的丙二醛活力的测定结果
3.5.6 小鼠主要脏器组织的过氧化氢水平的测定结果
3.5.7 小鼠主要脏器组织的超氧阴离子自由基水平的测定结果
3.5.8 小鼠主要脏器组织的氧化还原电位水平的测定结果
第4章 总结与展望
4.1 总结
4.2 存在的问题与展望
参考文献
致谢
本文编号：3743133
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 自由基的概述
1.1.1 自由基和活性氧的定义及联系
1.1.2 人体中自由基的种类及来源
1.1.3 自由基与氧化应激
1.1.4 降低自由基的危害
1.2 生物体内的氧自由基研究方法概述
1.2.1 生物体内的氧自由基的产生过程
1.2.2 生物体内的自由基的研究思路
1.2.3 自由基的测定方法
1.3 线粒体环状排列黄色荧光蛋白探针(MITO-CPYFP)的概述
1.3.1 Mito-cpYFP的发现及其探究
1.3.2 Mito-cpYFP的结构
1.3.3 Mito-cpYFP的优势及应用
1.4 C57BL/6-TGH(MITO-CPYFP)小鼠的构建
1.4.1 构建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的意义
1.4.2 C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠构建流程
1.5 反转录定量PCR
1.5.1 SYBR GreenⅠ荧光染料法
1.5.2 相对定量和绝对定量
1.6 寿命期限与氧化应激
1.6.1 衰老与寿命期限
1.6.2 端粒与氧化应激对寿命影响
1.7 动物行为学表型
1.7.1 氧化还原状态与行为学
1.7.2 Mito-cpYFP与行为学
1.8 研究的意义和主要内容
1.8.1 研究意义
1.8.2 本文的主要研究内容
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 小鼠饲料配方
2.1.3 主要材料与试剂
2.1.4 主要仪器和设备
2.2 小鼠MITO-CPYFP的表达量测定
2.2.1 小鼠主要脏器的RNA的提取和测定RNA浓度
2.2.2 小鼠主要脏器组织RNA电泳
2.2.3 RT-PCR反应
2.2.4 Real Time PCR反应
2.2.5 △△Ct法的相对量计算方法
2.3 C57BL/6-TGH(MITO-CPYFP)小鼠的寿命实验方法
2.3.1 实验动物的繁殖及饲养
2.3.2 实验动物的寿命记录
2.4 小鼠行为学实验方法
2.4.1 行为学实验动物的饲养与准备
2.4.2 旷场实验
2.4.3 水迷宫实验
2.4.4 爬杆耐力实验
2.4.5 倾斜平板实验
2.4.6 筑巢实验
2.5 生物标志物测定
2.5.1 生物标志物测定的实验动物
2.5.2 小鼠的脏器指数测定和组织匀浆的制备
2.5.3 BCA蛋白浓度测定
2.5.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定
2.5.5 过氧化氢酶(CAT)测定
2.5.6 总一氧化氮合成酶(T-NOS)测定
2.5.7 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测定
2.5.8 丙二醛(MDA)测定
2.5.9 过氧化氢(H2O2)的测定
2.5.10 超氧阴离子自由基(O2
·-)的测定
2.5.11 氧化还原电位(Eh)的测定
2.6 数据处理和统计分析
第3章 结果与分析
3.1 小鼠的MITO-CPYFP的表达量
3.1.1 野生型及转基因小鼠各组织RNA电泳
3.1.2 野生型及转基因小鼠各组织cpYFP半定量结果
3.1.3 野生型及转基因小鼠各组织cpYFP定量结果
3.2 野生型及转基因小鼠的寿命结果
3.3 野生型及转基因小鼠的行为学实验结果
3.3.1 旷场实验
3.3.2 水迷宫实验
3.3.3 爬杆实验
3.3.4 协调运动能力实验
3.3.5 筑巢实验
3.4 小鼠主要脏器的脏器指数和蛋白浓度测定结果
3.4.1 小鼠的主要脏器的脏器指数测定结果
3.4.2 小鼠的主要脏器的蛋白浓度测定结果
3.5 小鼠主要脏器组织的抗氧化功能的测定结果
3.5.1 小鼠主要脏器组织的过氧化氢酶活力的测定结果
3.5.2 小鼠主要脏器组织的总超氧化物歧化酶活力的测定结果
3.5.3 小鼠主要脏器组织的总一氧化氮合成酶活力的测定结果
3.5.4 小鼠主要脏器组织的谷胱甘肽过氧化氢酶活力的测定结果
3.5.5 小鼠主要脏器组织的丙二醛活力的测定结果
3.5.6 小鼠主要脏器组织的过氧化氢水平的测定结果
3.5.7 小鼠主要脏器组织的超氧阴离子自由基水平的测定结果
3.5.8 小鼠主要脏器组织的氧化还原电位水平的测定结果
第4章 总结与展望
4.1 总结
4.2 存在的问题与展望
参考文献
致谢
本文编号：3743133
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3743133.html
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