小黑杨MYB122基因耐盐胁迫功能分析

发布时间：2023-02-15 18:27

　　MYB转录因子家族是植物中功能多样且数目庞大的家族之一,其在植物的抗逆、发育及信号转导过程中发挥重要作用。前期研究发现MYB122基因受盐胁迫诱导表达,本研究对PsnMYB122基因的耐盐功能进行分析。结果如下:通过PlantTFDB在线网站获取了毛果杨MYB122基因的CDS序列,设计特异性引物,从小黑杨中克隆出951bp的PsnMYB122基因CDS序列,通过生物信息学分析发现该基因编码的蛋白质包含317个氨基酸,分子量为36.4 kDa,为亲水蛋白。RT-qPCR分析表明,PsnMYB122基因表达具有组织特异性,并受盐胁迫诱导表达。在150 mM NaCl胁迫条件下,该基因在根中的表达水平明显比在叶和茎中表达水平高,并在胁迫12h表达量达到最高。将PsnMYB122基因构建于pBI121-GFP载体进行亚细胞定位,发现PsnMYB122蛋白定位在细胞核中。构建pGBKT7-PsnMYB122载体进行酵母双杂交实验,发现PsnMYB122具有转录自激活活性,其转录激活域位于C端1-60aa之间。构建pGADT7-Rec-PsnMYB 122载体与pAbAi-target prom...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 引言
    1.2 抗逆相关转录因子
        1.2.1 盐胁迫相关NAC类转录因子的研究进展
        1.2.2 盐胁迫相关WRKY类转录因子的研究进展
        1.2.3 盐胁迫相关AP2/ERF类转录因子的研究进展
    1.3 MYB转录因子研究进展
        1.3.1 MYB转录因子结构特征研究进展
        1.3.2 MYB转录因子的生物学功能研究进展
        1.3.3 MYB转录因子的抗逆功能研究进展
    1.4 研究目的及意义
2 小黑杨MYB122基因克隆及分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料与生长环境
        2.1.2 载体与菌种
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 培养基配制
        2.1.5 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 小黑杨RNA的提取与反转录
        2.2.2 小黑杨PsnMYB122基因的克隆与pMD19-T-PsnMYB122的构建
        2.2.3 小黑杨PsnMYB122基因的生物信息学分析
        2.2.4 pBI121-GFP-PsnMYB122融合表达载体的构建
        2.2.5 基因枪瞬时转化
        2.2.6 小黑杨PsnMYB122基因的时空表达分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 MYB122转录因子基因的生物信息学分析
        2.3.2 Pbi121-MYB122-GFP融合表达载体的构建
        2.3.3 PsnMYB122基因的时空表达分析
    2.4 本章小结
3 PsnMYB122基因的表达及抗盐功能分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 植物材料及生长条件
        3.1.2 实验菌种
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 培养基配制
        3.1.5 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 植物过表达载体pBI121-PsnMYB122的构建
        3.2.2 pBI121-PsnMYB122稳定转基因烟草的获取
        3.2.3 转基因烟草的生理指标测定
        3.2.4 转基因烟草组织化学染色分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 植物过表达载体pBI121-PsnMYB122的构建
        3.3.2 转基因烟草的筛选及鉴定
        3.3.3 转基因烟草的耐盐性分析
        3.3.4 转基因烟草的生理指标测定
        3.3.5 转基因烟草组织化学染色
    3.4 本章小结
4 PsnMYB122转录激活结构域研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验菌种
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 药品及培养基制备
    4.2 实验方法
        4.2.1 pGBKT7-PsnMYB122载体构建
        4.2.2 pGBKT7-PsnMYB122的转录自激活结构域研究
        4.2.3 pGBKT7-PsnMYB122的转录自激活检测
    4.3 结果与分析
        4.3.1 pGBKT7-PsnMYB122载体构建
        4.3.2 pGBKT7-PsnMYB122转录激活活性检测
        4.3.3 PsnMYB122转录激活结构域研究
    4.4 本章小结
5 PsnMYB122与已知作用元件互作验证
    5.1 实验材料
        5.1.1 菌株与载体
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 药品及培养基制备
    5.2 实验方法
        5.2.1 pGADT7-Rec-PsnMYB122载体构建
        5.2.2 已知元件的查找
        5.2.3 pAbAi-target promoter诱饵载体构建
        5.2.4 PsnMYB122与已知元件互作验证
    5.3 实验结果
        5.3.1 pGADT7-Rec-PsnMYB122载体的构建
        5.3.2 酵母单杂交实验结果分析
    5.4 本章小结
讨论
结论
参考文献
致谢



本文编号：3743608