果蝇自噬相关基因Syntaxin17的定位以及功能检测

发布时间：2023-02-15 17:58

　　自噬(autophagy)是细胞内重要的生理过程,其主要通过溶酶体降解细胞内长寿蛋白和生理或病理原因引起的衰老或损坏的细胞器,从而维持细胞内的稳态。SNARE蛋白家族成员Syntaxin17(Syx17)一个自噬相关的蛋白,它通过与Usnp(SNAP-29)Vamp7形成复合物触发自噬体与溶酶体融合进而促进自噬过程。我们实验室此前的研究显示Syx17基因突变后会引起果蝇三龄幼虫神经肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)的发育异常,但是果蝇中Syx17表达的组织定位及其相应的功能尚不十分清楚。本课题用CRISPR/Cas9技术及同源重组技术将Syx17的阅读编码框替换为Gal4,获得Syx17-Gal4品系。经鉴定Syx17-Gal4既可以作为敲除突变品系分析突变体表型,也可以通过驱动荧光蛋白(如GFP)从而观察内源性Syx17的表达定位。结果显示Syx17广泛分布于中枢神经系统(central nervous system,CNS)以及突触前神经肌肉接头中;Syx17-Gal4也显示NMJ的Bouton异常。值得注意的是,我们发现Syx17高表达于果蝇大脑蘑菇...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
主要缩略词表
前言
第一章 文献综述
    1.1 SNARE蛋白的研究进展
        1.1.1 SNARE蛋白的发现
        1.1.2 SNARE蛋白的结构
        1.1.3 SNARE假说
        1.1.4 SNARE蛋白与疾病
    1.2 Syntaxin17 概述
    1.3 自噬的研究进展
        1.3.1 自噬的分子机制
        1.3.2 自噬与疾病
    1.4 活性氧簇(ROS)产生的来源与危害
    1.5 展望
第二章 实验材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 仪器
        2.1.2 试剂
        2.1.3 果蝇的品系
        2.1.4 果蝇的饲养
    2.2 实验方法
        2.2.1 PCR割胶回收测序鉴定Syx17 knock in Gal4
        2.2.2 果蝇基因组DNA的提取
        2.2.3 免疫荧光染色
        2.2.4 果蝇睡眠行为分析
        2.2.5 果蝇的嗅觉学习记忆能力检测
第三章 实验结果与分析
    3.1 Syx17的结构和功能
    3.2 CRISPR/Cas9 制备Syx17 knock in Gal4 果蝇的设计和鉴定
        3.2.1 PCR鉴定
        3.2.2 Western blot检测
    3.3 Syx17主要表达在突触前神经肌肉接头和中枢神经系统
        3.3.1 Syx17 在果蝇突触前神经肌肉接头(NMJ)处表达
        3.3.2 Syx17在果蝇中枢神经系统中表达
    3.4 在蘑菇体中敲减Syx17后引起蘑菇体处自噬小体的累积
    3.5 在蘑菇体中敲减Syx17对嗅觉学习记忆和睡眠节律未见明显影响
    3.6 果蝇Syx17 影响活性氧(ROS)水平
    3.7 果蝇Syx17突变体中ROS水平异常的原因
第四章 讨论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3743562