单倍体酿酒酵母的丙酮酸脱羧酶基因(pdc1)的敲除与鉴定

发布时间：2023-02-25 16:49

　　为了抑制单倍体酿酒酵母H14的副产物乙醇的合成,使得2,3-丁二醇产量的提升。利用基因工程手段构建载体pWCL-pdc1,获得两端含40 bp pdc1的同源重组片段-loxP-kanMX-loxP。利用Cre/loxP技术获得pdc1缺失菌株S. cerevisiae H14-01 (△pdc1)。并以野生型菌株S. cerevisiae H14为对照,进行摇瓶发酵试验。S. cerevisiae H14-01长势明显略低于原始菌株。在整个发酵期间,2,3-丁二醇的最高产量和转化率分别为0.373±0.016 g/L和0.005 g/g,分别较原始菌株提高了37.30%和4.66%,但原始菌株没有检测到乙偶姻和2,3-BD生成。另外S. cerevisiae H14-01的乙醇转化率降低了33.24%,但甘油产量提高了15.76%。说明了碳流流向乙醇被阻断之后,会增加2,3-丁二醇的产量,同时会使此部分碳流流向甘油。因此,并为进一步获得高产2,3-丁二醇的工程微生物群体奠定了基础。

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【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株及质粒
        1.1.2 酶与试剂
        1.1.3 扩增引物
        1.1.4 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 同源重组片段pdc1-loxP-kanMX的获得及转化
        1.2.2 Cre重组酶消除G418抗性
        1.2.3 重组菌株发酵性能检测
2 结果与分析
    2.1 基因片段loxP-kanMX-loxP的克隆及转化
    2.2 重组菌株的筛选及鉴定
        2.2.1 菌落PCR验证
        2.2.2 基因组PCR验证
    2.3 pSH69质粒转化至酿酒酵母
    2.4 Cre重组酶消除G418抗性
    2.5 抗性片段kanMX敲除验证
    2.6 重组菌株发酵分析
3 讨论与结论



本文编号：3748825