微小RNA-141靶向调控EGFR基因抑制头颈鳞癌细胞生长和侵袭的研究

发布时间：2023-02-26 00:47

　　研究背景与目的:头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)作为人类最常见的六种癌症之一,70%以上的患者伴有复发或者转移,是目前严重影响人类生存健康的上皮来源恶性肿瘤。因此,寻找有效的治疗方案来治疗HNSCC成为当前的迫切需要。miRNA是一类内生性单链非编码小RNA,长度为20-24个核苷酸,通过结合到mRNA来调节蛋白编码,存在于动植物当中,广泛参与转录后基因的表达和调控,如细胞分化、增殖、凋亡和细胞周期调节等。目前,只有少数miRNAs的生物学功能被阐明,这些miRNAs被证实广泛地参与生命过程中的各种生理和病理过程。miRNA-141是miRNA-200家族中的一个,位于12p13.31,是一个成熟的序列,全长共22nt。近期研究发现miRNA-141可作为癌基因或者抑癌基因,通过调节不同的信号传导通路,在多种癌症中异常表达,例如胃癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、膀胱癌和卵巢癌,参与恶性肿瘤的增殖、分化、迁移,影响患者的预后。目前,miRNA-141在头颈鳞癌发生发展中的作用机制尚无明确报道。EGFR即表皮生长因子受体,...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 miRNA-141与EGFR在头颈鳞状细胞癌中的表达及相关性分析
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象
        2.3 实验与分析方法
            2.3.1 头颈鳞癌组织miRNA基因表达谱检测
            2.3.2 提取组织样本的总RNA
            2.3.3 RNA浓度和纯度的测定
            2.3.4 反转录(Reverse Transcription,RT)
            2.3.5 实时荧光定量分析
            2.3.6 头颈部鳞状细胞癌患者组织中miRNA-141 的差异表达与临床病理特征之间的关系
            2.3.7 统计分析
    3 结果
        3.1 头颈鳞癌组织miRNA基因芯片检测
        3.2 生物信息学软件预测miR-141 下游靶基因
        3.3 miR-141和EGFR在头颈部鳞状细胞癌原发灶癌组织和癌旁正常组织中的表达
        3.4 头颈部鳞状细胞癌患者组织中miRNA-141 的表达与临床病理特征之间的关系
    4 讨论
第二部分 miR-141 对头颈鳞癌细胞系中EGFR表达及细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响
    5 前言
    6 材料和方法
        6.1 主要试剂和仪器
            6.1.1 主要试剂
            6.1.2 主要仪器
        6.2 研究对象
        6.3 实验与分析方法
            6.3.1 细胞培养
            6.3.2 细胞转染、双荧光素酶报告基因检测
            6.3.3 Western Blot
            6.3.4 RT-PCR检测INOK、FaDu和 Cal-27 细胞中miR-141和EGFR的表达水平
            6.3.5 MTT实验
            6.3.6 JC-1 测定
            6.3.7 Transwell实验
            6.3.8 统计分析
    7 结果
    8 讨论
第三部分 miR-141/EGFR轴抑制头颈鳞癌转移的体内研究
    9 前言
    10 材料和方法
        10.1 主要试剂和仪器
            10.1.1 主要试剂
            10.1.2 主要仪器
        10.2 研究对象
        10.3 实验与分析方法
            10.3.1 头颈鳞癌肝转移在体实验
            10.3.2 苏木精伊红染色(HE染色)
            10.3.3 Western Blot测定组织样本中EGFR、CDK4、bcl-2、MMP2 蛋白的表达
            10.3.4 RT-PCR方法检测组织样本中miR-141和EGFR、CDK4、bcl-2、MMP2的表达
    11 结果
    12 讨论
结论
本研究的创新性的自我评价
参考文献
综述 miRNA 和 lncRNA 相互作用与恶性肿瘤相关性的研究进展
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3749488