禽致病性大肠杆菌lsrR基因敲除对耐药性影响的研究

发布时间：2023-03-11 17:16

　　禽致病性大肠杆菌是一种在家畜养殖业中最常见的致病菌,禽致病性大肠杆菌感染会使家禽死亡率增加,给养禽业带来巨大的经济损失。已有转录组学实验证实了lsrR的敲除会影响到大肠杆菌100多个基因的转录水平,这涉及到了生物被膜形成、转录调控、压力环境下的蛋白表达及营养获取等生理活动。经查找文献发现MFS外排泵中的转运蛋白MdtH对诺氟沙星具有抗性。此实验揭示了禽致病性大肠杆菌lsrR缺失对于耐药基因mdtH的影响,进而阐明了lsrR对耐药基因mdtH的调控机制。1.用二倍稀释法验证诺氟沙星,氧氟沙星,环丙沙星和四环素对WT(AEPC40)和XY10(AEPC40AlsrR)的耐药程度。结果发现,WT和XY10对四种抗生素的MIC值是一样的。用CFU法检验抗生素对WT和XY10耐药性的影响,结果显示四种抗生素对WT和XY10的影响趋势是一致的,XY10的CFU值都比WT的CFU值高2倍以上。2.构建lsrR和mdtH的过表达菌株,在四种抗生素压力下,过表达菌株WT/pUClsrR 的 MIC 值与 WT/pUC19 和 XY10/pUC19 的 MIC 值相比降低了 8 倍,在四环素压力下过表达菌...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
文献综述
    1 禽致病性大肠杆菌的研究背景
        1.1 大肠杆菌的概述
        1.2 APEC的致病机制
        1.3 APEC的毒力因子
        1.4 APEC的防治方法
    2 lsrR基因的研究进展
        2.1 lsrR基因的研究背景
        2.2 群体感应系统研究进展
        2.3 具有Lsr系统的AI-2在细菌中的作用
    3 细菌的主要外排泵研究进展
        3.1 细菌的主要外排泵的概述
        3.2 MFS外排泵的研究进展
1 引言
    1.1 本课题研究的目的及意义
    1.2 国内外研究进展
    1.3 实验内容和方法
    1.4 主要技术路线
2 实验材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验菌株
        2.1.2 主要试剂和试剂盒
        2.1.3 培养基和常用试剂的配制
        2.1.4 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 分子生物学法鉴定菌株
        2.2.2 APEC药敏试验
        2.2.3 抗生素对APEC生长的影响
        2.2.4 过表达菌株和回补菌株的表达
        2.2.5 生长曲线的测定
        2.2.6 APEC总RNA的提取
        2.2.7 RT-qPCR检测目的菌株中mdtH基因的转录水平
        2.2.8 LsrR蛋白纯化表达
        2.2.9 凝胶阻滞实验
3 结果与分析
    3.1 WT和XY10的药敏试验
        3.1.1 目的菌株最小抑菌浓度(MIC)
    3.2 抗生素对WT和XY10生长的影响
        3.2.1 CFU法
    3.3 回补lsrR以及过表达lsrR、mdtH
    3.4 过表达和回补菌株的药敏试验
        3.4.1 过表达和回补菌株最小抑菌浓度(MIC)
    3.5 抗生素对过表达和回补菌株生长的影响
        3.5.1 CFU法
    3.6 生长曲线测定
    3.7 反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)
        3.7.1 总RNA质量鉴定
        3.7.2 RT-qPCR检测目的菌株mdtH的转录水平
    3.8 LsrR蛋白对mdtH的调控机制
        3.8.1 克隆载体的构建
        3.8.2 LsrR蛋白的提取与纯化
        3.8.3 LsrR蛋白对mdtH的调控机制
4 讨论
    4.1 APEC耐药现状
    4.2 基因lsrR与mdtH之间的联系
    4.3 RT-qPCR对目的菌株mdtH转录水平的检测
    4.4 LsrR蛋白对mdtH的调控机制
5 结论
参考文献
作者简介



本文编号：3759924