慢病毒介导NCL基因沉默的胃癌细胞系的建立及对细胞增殖影响的研究

发布时间：2023-03-11 21:56

　　目的:本研究通过建立慢病毒介导的NCL基因沉默的胃癌细胞系,研究NCL沉默对胃癌细胞增殖能力的影响,为深入探究胃癌发生发展的分子机制提供理论基础。方法:利用小发卡RNA(shRNA)介导的慢病毒系统沉默胃癌细胞中的NCL,并利用RT-q PCR和免疫印迹检测基因沉默效果;并利用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖能力的改变。结果:琼脂糖凝胶电泳实验检测经酶切鉴定的pKLO.1-NCL载体,显示5000 bp和2000 bp两条带,测序峰图显示与设计序列一致;利用HEK293T包装病毒,感染胃癌细胞SGC-7901,免疫印迹结果显示sh NCL组NCL蛋白水平显著低于对照组,RT-qPCR结果显示,sh NCL组NCL表达量显著降低,为对照组的0.4209±0.087倍(P<0.001);CCK-8实验结果显示,sh NCL组在第5天的吸光值较对照组显著降低(P<0.001),平板克隆形成实验结果显示,sh NCL组克隆形成能力较对照组显著降低,克隆形成数量显著低于对照组(P<0.01)。结论:建立了慢病毒介导的NCL基因沉默的胃癌细胞系SGC-7901,...

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【文章目录】：
前言
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 NCL基因沉默的病毒载体质粒的构建
        1.2.3 慢病毒的包装
        1.2.4 慢病毒感染和稳定细胞株筛选
        1.2.5 细胞RNA提取和q RT-PCR
        1.2.6 细胞样品处理和免疫印迹
        1.2.7 CCK-8实验检测细胞增殖
        1.2.8 平板克隆形成实验检测细胞增殖
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 NCL基因沉默的病毒质粒的构建
    2.2 NCL基因沉默的胃癌细胞系的建立
    2.3 NCL基因沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响
3 讨论



本文编号：3760328