川续断Actin、Tubulin和GAPDH基因的克隆及表达稳定性分析

发布时间：2023-03-21 13:42

　　目的从川续断Dipsacus asper中克隆并筛选出稳定的内参基因用于实时荧光PCR(qRT-PCR)的分析校正,为今后川续断功能基因的表达分析及调控机制研究提供基础。方法从川续断转录组数据库中筛选并克隆肌动蛋白(Actin)、微管蛋白(Tubulin)、GAPDH基因家族内参基因的核心片段,以不同产地、不同组织部位和不同发育时期的川续断植株为材料,通过qRT-PCR获得各基因的表达信息,利用ge Norm、NormFinder、BestKeeper、Delta CT、RefFinder共5个内参评价软件分析各基因的表达稳定性,综合评价并筛选出最佳的川续断内参基因。结果克隆获得10个候选内参基因核心片段,分别属于Actin、Tubulin、GAPDH3大基因家族,各家族基因序列间同源性较高;稳定性综合分析结果显示,DaACT103在不同产地及不同组织部位的表达稳定性较强且表达量相对较高,Da TUB5在不同发育时期的表达稳定性较强且表达量相对较低。结论 Da ACT103和Da TUB5均可作为川续断的内参基因,其中,Da ACT103适用于作为具有较高表达丰度基因的内参基因;Da ...

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【文章目录】：
1 材料及仪器试剂
    1.1 材料
    1.2 仪器及试剂
2 方法
    2.1 总RNA的提取与逆转录
    2.2 候选基因的获得与PCR扩增
    2.3 切胶回收、TA克隆及序列分析
    2.4 q RT-PCR
    2.5 稳定性分析
    2.6 引物特异性及扩增效率
3 结果与分析
    3.1 总RNA质量检测与PCR扩增
    3.2 序列同源性及进化树分析
    3.3 表达稳定性分析
        3.3.1 不同产地川续断候选内参基因稳定性分析
        3.3.2 不同组织部位川续断候选内参基因稳定性分析
        3.3.3 不同发育时期川续断候选内参基因稳定性分析
    3.4 引物扩增效率
4 讨论



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