拟南芥SPT16基因影响花药发育模式形态建成

发布时间：2023-03-30 03:45

　　组蛋白分子伴侣FACT可以负调控核小体的稳定性,从而促进染色体基因的转录。在植物中FACT是由两个保守的蛋白质亚基SSRP1和SPT16组成的复合物。SPT16蛋白被报道影响拟南芥营养体的生长和结实率,但是其对雄性发育的影响仍未报道。因此,我们从拟南芥生物资源中心(ABRC)购买了编码该蛋白的SPT16基因的T-DNA插入突变体株系CS805649。初步分析表明,CS805649(spt16)突变体中SPT16基因表达水平下调,并且突变体的雄性育性下降。进一步通过组织切片发现,spt16突变体的花药发育异常,其花药早期内层细胞层和小孢子母细胞发育明显缺陷,并且花粉囊结构完整性也发生异常。然后,通过亚历山大染色分析表明,spt16中成熟花粉数量明显减少。遗传分析表明,突变体spt16所导致的雄性不育表型是由于单核基因隐性突变所致。基因克隆分析发现两个T-DNA右臂背靠背位于拟南芥基因组第四条染色体SPT16(At4g10710)基因的启动子区域。连锁分析实验的结果表明spt16的突变表型与T-DNA插入是紧密连锁的。这些结果证明,SPT16基因的突变会导致雄性发育缺陷。更进一步的mRNA...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 染色质与核小体
    1.2 组蛋白分子伴侣
        1.2.1 FACT(FacilitateChromatinTranscription)
    1.3 花药发育的基本过程
    1.4 拟南芥花药早期发育的调节基因
        1.4.1 AG基因
        1.4.2 AG基因对SPL基因表达的调控
        1.4.3 SPL基因与BAM基因的相互作用
    1.5 花粉壁及绒毡层在花粉壁形成中的作用
    1.6 本研究工作的内容和意义
第2章 材料方法
    2.1 材料试剂
        2.1.1 植株
        2.1.2 菌株
        2.1.3 质粒
        2.1.4 仪器
        2.1.5 试剂、抗生素
        2.1.6 培养基配置
    2.2 拟南芥种植
        2.2.1 土壤养植
        2.2.2 培养基培养
    2.3 植物组织总DNA的提取
    2.4 植物总RNA的抽提与纯化
    2.5 RNA的反转录
    2.6 PCR扩增
        2.6.1 高保真PCR
        2.6.2 鉴定PCR、RT-PCR
        2.6.3 qPCR
    2.7 DNA胶回收、测序
    2.8 质粒小抽及大抽
    2.9 感受态的制备与转化
        2.9.1 转化大肠杆菌
        2.9.2 GV3101感受态的细胞制备
        2.9.3 转化农杆菌
    2.10 T-DNA插入位点鉴定
    2.11 基因克隆与互补载体的构建
    2.12 转基因植株的筛选
    2.13 原位杂交
第3章 结果
    3.1 突变体spt16的表型
    3.2 spt16的遗传分析
    3.3 spt16突变基因的克隆
    3.4 spt16的连锁分析
    3.5 SPT16基因的表达及时空分布
    3.6 spt16的花粉壁发育缺陷
    3.7 spt16的花药药室结构缺失
    3.8 SPT16的基因克隆及功能互补
第4章 讨论
    4.1 SPT16在早期花药发育中发挥了重要的作用
    4.2 SPT16可能在造孢细胞中发挥作用
    4.3 SPT16在花药发育模式形成中发挥重要作用
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3775122