尼罗罗非鱼TNF-R1和TNF-R2基因克隆及表达

发布时间：2023-04-09 04:34

　　为揭示TNF-α受体基因TNF-R1和TNF-R2在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程的作用,本研究利用RACE技术获得了TNF-R1和TNF-R2的cDNA。结果表明,TNF-R1 cDNA全长2 275 bp,ORF区1 335bp,编码444个氨基酸;TNF-R2 cDNA全长1 719 bp,ORF区1 476 bp,编码491个氨基酸。TNF-R1含3个富含半胱氨酸结构域(cysteine-rich domain, CRD)和一个死亡结构域(death domain,DD),而TNF-R2有4个CRD,缺少DD。系统进化分析表明:其TNF-R1和TNF-R2分别与其他脊椎动物TNF-R1和TNF-R2基因同源性很高,在进化树中TNF-R1、TNF-R2各自聚类且两者之间分支明显。实时荧光定量PCR结果表明:TNF-R1和TNF-R2在该鱼体的不同组织中均有表达,其中在鳃、头肾和脾脏中表达水平最高,而在肌肉、垂体中表达量低。用脂多糖(LPS)和多聚肌苷酸-胞苷酸(PolyⅠ:C)分别刺激离体孵育的该鱼头肾和脾脏白细胞可不同程度上调TNF-α、TNF...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验用鱼和样品采集
    1.2 RNA提取与反转录
    1.3 TNF-R1与TNF-R2 c DNA的克隆和测序
    1.4 生物信息学分析
    1.5 Realtime PCR分析
    1.6 体外实验：细胞孵育和免疫刺激
    1.7 在体实验：感染攻毒实验
    1.8 统计分析
2 结果与分析
    2.1 尼罗罗非鱼TNF-R1和TNF-R2序列分析
    2.2 尼罗罗非鱼TNF-R1和TNF-R2的组织表达分析
    2.3 尼罗罗非鱼TNF-α、TNF-R1和TNF-R2的体外刺激表达分析
    2.4 尼罗罗非鱼TNF-R1和TNF-R2的体内刺激表达分析
3 讨论



本文编号：3787073