黄瓜叶酸合成关键基因克隆与分析

发布时间：2023-04-09 02:25

　　【目的】分析黄瓜基因组中与叶酸合成代谢相关的基因数量、定位以及表达特征,对关键酶基因进行生物信息学分析与克隆,旨在为黄瓜叶酸合成调控研究奠定基础。【方法】根据已报道的拟南芥叶酸合成相关基因,利用黄瓜基因组数据库中9930_V3版本进行BLAST比对。利用MapChart绘制黄瓜染色体物理图谱并对基因定位。利用qRT-PCR分析这些基因在黄瓜果实发育不同时期和不同材料中的表达量。通过MEGA、WebLOGO、ExPASy等工具对关键酶基因进行生物信息学分析。通过PCR扩增对关键酶基因进行克隆,并测序分析基因的序列差异。【结果】同源比对获得19个黄瓜叶酸代谢相关基因,这些基因不均匀分布在黄瓜7条染色体上,且以Chr.4和Chr.5上分布最多。通过对其中11个调控叶酸合成的基因在测序黄瓜9930果实发育不同时期以及果实叶酸含量高低差异显著的2份材料的表达量分析,发现CsFPGS、CsHPPK/CsDHPS和CsDHNA 3个基因与果实叶酸含量变化趋势完全一致;CsADCS、CsADCL、CsDHNA、CsHPPK/CsDHFS、CsFPGS、CsDHFS等基因的表达量在2...

【文章页数】：17 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 黄瓜叶酸合成代谢相关基因鉴定
        1.2.2 黄瓜材料取样方式及叶酸含量测定
        1.2.3 总RNA的提取与cDNA第一链的合成
        1.2.4 黄瓜叶酸合成基因在果实发育不同时期及不同材料中的表达量分析
        1.2.5 黄瓜叶酸合成关键酶基因的蛋白序列比对及系统进化树构建
        1.2.6 黄瓜GCHI及ADCS的克隆与序列分析
        1.2.7 基因的生物信息学分析
2 结果
    2.1 黄瓜叶酸合成相关基因
    2.2 基因的染色体定位
    2.3 9930果实发育不同时期叶酸含量及对应时期的叶酸合成基因的表达量
    2.4 果实叶酸含量高低差异显著材料65G和02245中基因的表达量分析
    2.5 黄瓜及其他物种GCHI蛋白质序列分析及进化树构建
    2.6 黄瓜及其他物种ADCS蛋白质序列分析及进化树构建
    2.7 黄瓜GCHI与ADCS基因全长的克隆与序列分析
    2.8 黄瓜GCHI与ADCS基因的生物信息学分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3786895