罗氏沼虾Lc3a、Gabarap基因的克隆及在副溶血弧菌胁迫下的表达分析

发布时间：2023-04-10 03:42

　　自噬(autophagy)是细胞的自我消化过程,是细胞内物质降解的主要途径。自噬的发生主要经历两个阶段,一是自噬体的形成,二是自噬体与溶酶体结合。自噬体具有双层膜结构,它包含大量的细胞代谢物,与溶酶体结合后将随着溶酶体被降解代谢。自噬是生物学过程中的重要调节因子,对饥饿、细胞死亡、癌症、神经退行性疾病,以及病毒防御都发挥着重要作用,是机体自身的一种自我保护措施。近年来大量的研究表明,自噬与免疫的关系也极为密切。自噬机制对抵御病原微生物至关重要。罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)属于甲壳纲,长臂虾科,沼虾属。具有生长较快,养殖周期短,食性广偏爱肉食,肉质营养成分好不饱和脂肪酸高,是我国重点养殖品种之一。目前对哺乳动物细胞、植物细胞和酵母细胞的自噬发生机制研究较多,但对水生类动物虾类和贝类细胞自噬机制的研究较少。对于自噬机制在罗氏沼虾中的研究尚未见报道。为此,本研究利用RACE技术进行基因克隆,首次克隆得到罗氏沼虾的Lc3a与Gabarap基因的cDNA全长,用q RT-PCR检测了Lc3a与Gabarap基因在罗氏沼虾主要组织里的表达模式;并研究了正常和副溶血...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
引言
    1.1 罗氏沼虾的发展现状及常见的病害问题
        1.1.1 罗氏沼虾
        1.1.2 罗氏沼虾的养殖现状与病害管理
    1.2 自噬的概念与发展
        1.2.1 自噬类型
        1.2.2 自噬过程及分子机制
    1.3 Lc3a和 Gabarap在自噬过程的表达
        1.3.1 Lc3a和 Gabarap在疾病中的作用
    1.4 自噬在水产动物中的研究进展
    1.5 研究的目的与意义
第二章 罗氏沼虾Lc3a基因的克隆
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 主要仪器和设备
        2.1.3 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 组织取样
        2.2.2 提取总RNA
        2.2.3 RNA反转录成cDNA
        2.2.4 PCR引物设计
        2.2.5 PCR扩增
        2.2.6 PCR产物的分离、回收和纯化
        2.2.7 目的片段与表达载体的连接
        2.2.8 连接产物的转化
        2.2.9 目的质粒的筛选和鉴定
        2.2.10 Lc3a基因的生物信息学分析
        2.2.11 Lc3a基因组织表达分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 部分PCR产物电泳图
        2.3.2 罗氏沼虾Lc3a基因cDNA序列分析
        2.3.3 罗氏沼虾Lc3a基因同源性及系统发育树分析
        2.3.4 罗氏沼虾Lc3a基因组织表达模式分析
    2.4 讨论
        2.4.1 罗氏沼虾Lc3a基因全长克隆
        2.4.2 罗氏沼虾Lc3a基因组织表达模式分析
第三章 罗氏沼虾Gabarap基因克隆
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验对象
        3.1.2 主要仪器和设备
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 RNA提取
        3.1.5 RNA反转录成cDNA
        3.1.6 mRNA全长克隆
        3.1.7 DNA提取
        3.1.8 DNA全长克隆
        3.1.9 PCR产物回收
        3.1.10 连接及转化
        3.1.11 目的质粒的筛选和鉴定
        3.1.12 Gabarap基因的生物信息学分析
        3.1.13 Gabarap基因组织表达分析
    3.2 实验结果
        3.2.1 部分PCR产物电泳图
        3.2.2 罗氏沼虾Gabarap基因cDNA序列分析与DNA全长
        3.2.3 罗氏沼虾Gabarap基因同源性及系统发育树分析
        3.2.4 罗氏沼虾Gabarap基因组织表达模式分析
    3.3 讨论
        3.3.1 罗氏沼虾Gabarap基因全长克隆
        3.3.2 罗氏沼虾Gabarap基因组织表达模式分析
第四章 副溶血弧菌胁迫下Lc3a和 Gabarap基因的表达分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 实验用水
        4.1.3 实验菌株
        4.1.4 主要仪器
        4.1.5 实验试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 副溶血弧菌感染实验
        4.2.2 Lc3a和 Gabarap基因的表达分析
    4.3 结果
        4.3.1 副溶血弧菌感染对罗氏沼虾肝胰腺组织Lc3a基因表达的影响
        4.3.2 副溶血弧菌感染对罗氏沼虾肝胰腺组织Gabarap基因表达的影响
        4.3.3 副溶血弧菌感染对罗氏沼虾肝胰腺组织Relish基因表达的影响
        4.3.4 副溶血弧菌对罗氏沼虾的累积死亡率的影响
    4.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢



本文编号：3788264