玉米籽粒1764突变体基因的精细定位及1763突变体基因的克隆与初步功能分析
发布时间：2023-04-22 01:37
玉米是全球最重要的粮食和饲料作物之一,玉米籽粒的品质和产量直接决定了玉米的应用价值。对玉米籽粒的研究有助于为提高玉米产量、改善玉米品质提供理论基础。玉米籽粒突变体为玉米籽粒的研究提供了良好的材料。1764突变体属于玉米籽粒发育缺陷型(defective kernel,dek)突变。该突变体成熟籽粒皱缩,胚乳填充不充分,胚发育严重缺陷,致死,不能萌发。相较于同时期的野生型,未成熟籽粒石蜡切片观察表明,突变体胚的发育严重受到影响,几乎不发育。未成熟籽粒的透射电镜分析表明,突变体胚乳细胞填充物不足,尤其是蛋白体的体积变小、数量减少。成熟籽粒的生化成分分析进一步说明,突变体籽粒中醇溶蛋白和非醇溶蛋白含量均显著下降,其中19 kDa和27 kDa醇溶蛋白的含量下降尤其显著。而突变体籽粒中淀粉的含量略有上升。本研究利用图位克隆的方法,将1764基因定位在8号染色体4.705933 M到5.212037 M之间。定位区间内有14个基因,通过测序分析已经排除了其中12个基因,另外2个基因仍然在分析确认之中。1763突变体同样属于玉米籽粒发育缺陷的dek突变体。该突变体成熟籽粒明显皱缩、空瘪,但种子仍可...
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 前言与综述
1.1 玉米简介
1.2 玉米籽粒结构及发育
1.3 玉米籽粒营养储存
1.3.1 胚乳淀粉
1.3.2 胚乳蛋白
1.4 玉米籽粒突变体
1.5 图位克隆技术
1.6 课题研究的意义
第二章 材料与方法
2.1 实验材料与试剂
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要试剂与仪器
2.1.3 常用试剂配方
2.2 实验方法
2.2.1 1764 突变体的表型分析
2.2.1.1 1764 突变体成熟籽粒的表型
2.2.1.2 百粒重分析
2.2.2 TPS法抽提玉米籽粒基因组
2.2.3 CTAB法抽提DNA
2.2.4 PCR体系与反应条件
2.2.5 RNA的抽提与反转录
2.2.6 实时定量PCR反应
2.2.7 未成熟籽粒石蜡切片制作与观察
2.2.8 透射电镜观察
2.2.9 Brandford法蛋白定量
2.2.10 籽粒胚乳淀粉含量的测定方法
2.2.11 Western Blot(SDS-PAGE)
2.2.12 醇溶蛋白及非醇溶蛋白抽提
2.2.13 蒽酮法测定未成熟玉米籽粒胚乳可溶性糖
2.2.14 硼酸钠法抽提玉米籽粒蛋白
2.2.15 转录组测序
第三章 1764 突变体的精细定位
3.1 实验结果
3.1.1 1764 突变体的表型分析
3.1.2 1764 突变体的百粒重及淀粉含量分析
3.1.3 1764 突变体的蛋白含量分析
3.1.4 1764 突变体的石蜡切片观察
3.1.5 1764 突变体的透射电镜观察
3.1.6 1764 突变体基因的染色体定位
3.1.7 1764 突变体基因的粗定位
3.1.8 1764 突变体基因的精细定位
3.1.9 1764 突变体候选区间内的基因
3.1.10 1764 突变体转录组中差异基因的GO分析
3.2 小结与讨论
3.2.1 1764 突变体的表型
3.2.2 1764 突变体的候选基因
第四章 1763 突变体基因的克隆和初步功能分析
4.1 实验结果
4.1.1 1763 突变体的候选基因的克隆
4.1.2 1763 突变体的淀粉及可溶性糖含量分析
4.1.3 1763 突变体的候选基因的转录本表达及启动子分析
4.1.4 1763 突变体的候选基因的蛋白水平的检测
4.1.5 1763 突变体转录组中差异基因的GO分析
4.3 小结与讨论
4.3.1 1763 突变体的转录本表达
4.3.2 1763 突变体的验证
4.3.3 1763 突变体中胚及胚乳物质积累的相互影响
参考文献
附录
作者在攻读硕士学位期间公开发表的成果
致谢
本文编号：3796655
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 前言与综述
1.1 玉米简介
1.2 玉米籽粒结构及发育
1.3 玉米籽粒营养储存
1.3.1 胚乳淀粉
1.3.2 胚乳蛋白
1.4 玉米籽粒突变体
1.5 图位克隆技术
1.6 课题研究的意义
第二章 材料与方法
2.1 实验材料与试剂
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要试剂与仪器
2.1.3 常用试剂配方
2.2 实验方法
2.2.1 1764 突变体的表型分析
2.2.1.1 1764 突变体成熟籽粒的表型
2.2.1.2 百粒重分析
2.2.2 TPS法抽提玉米籽粒基因组
2.2.3 CTAB法抽提DNA
2.2.4 PCR体系与反应条件
2.2.5 RNA的抽提与反转录
2.2.6 实时定量PCR反应
2.2.7 未成熟籽粒石蜡切片制作与观察
2.2.8 透射电镜观察
2.2.9 Brandford法蛋白定量
2.2.10 籽粒胚乳淀粉含量的测定方法
2.2.11 Western Blot(SDS-PAGE)
2.2.12 醇溶蛋白及非醇溶蛋白抽提
2.2.13 蒽酮法测定未成熟玉米籽粒胚乳可溶性糖
2.2.14 硼酸钠法抽提玉米籽粒蛋白
2.2.15 转录组测序
第三章 1764 突变体的精细定位
3.1 实验结果
3.1.1 1764 突变体的表型分析
3.1.2 1764 突变体的百粒重及淀粉含量分析
3.1.3 1764 突变体的蛋白含量分析
3.1.4 1764 突变体的石蜡切片观察
3.1.5 1764 突变体的透射电镜观察
3.1.6 1764 突变体基因的染色体定位
3.1.7 1764 突变体基因的粗定位
3.1.8 1764 突变体基因的精细定位
3.1.9 1764 突变体候选区间内的基因
3.1.10 1764 突变体转录组中差异基因的GO分析
3.2 小结与讨论
3.2.1 1764 突变体的表型
3.2.2 1764 突变体的候选基因
第四章 1763 突变体基因的克隆和初步功能分析
4.1 实验结果
4.1.1 1763 突变体的候选基因的克隆
4.1.2 1763 突变体的淀粉及可溶性糖含量分析
4.1.3 1763 突变体的候选基因的转录本表达及启动子分析
4.1.4 1763 突变体的候选基因的蛋白水平的检测
4.1.5 1763 突变体转录组中差异基因的GO分析
4.3 小结与讨论
4.3.1 1763 突变体的转录本表达
4.3.2 1763 突变体的验证
4.3.3 1763 突变体中胚及胚乳物质积累的相互影响
参考文献
附录
作者在攻读硕士学位期间公开发表的成果
致谢
本文编号：3796655
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3796655.html
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