CRISPR/Cas9技术应用于斜纹夜蛾GOBP2基因功能研究的探讨

发布时间：2023-04-26 05:16

　　CRISPR/Cas9系统是在细菌和古细菌体内发现的一种获得性免疫机制,通过嵌合的双链RNA介导的Cas9蛋白对靶基因进行基因组编辑,从而沉默靶基因的表达。通过不断改进,将该系统用于基因敲除具有效率高、周期短、操作简单、经济等特点,已经成功应用于多种模式昆虫(包括果蝇、家蚕等)的基因组编辑中,但在非模式昆虫中应用很少,更未见有在嗅觉基因功能研究中的应用。斜纹夜蛾Spodoptera litura属夜蛾科,是一种世界性分布的重要农业害虫。普通气味结合蛋白(General odorant binding protein,GOBP)高浓度存在于嗅觉感器的液腔内,负责将进入感器内的脂溶性寄主植物气味结合并运输到嗅觉神经树突表面的受体(Olfactory recetptor,OR)部位,但受技术所限其生理功能一直缺乏活体研究的直接证据。本研究探讨了 CRISPR/Cas9技术在斜纹夜蛾GOBP2基因敲除中的应用,获得了多种不同类型的突变嵌合体,并经筛选得到1个GOBP2基因缺失了 3个碱基并插入6个碱基的斜纹夜蛾突变品系。利用触角电位仪(Electroantennography,EAG)进行电生...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 CRISPR/CAs系统的基本介绍
        1.1 CRISPR/Cas系统的研究进展
        1.2 CRISPR/Cas的结构组成
        1.3 CRISPR/Cas的分类
    2 CRISPR/CAs9系统的研究进展
        2.1 CRISPR/Cas9的发现
        2.2 CRISPR/Cas9系统在基因编辑中的应用
        2.3 CRISPR/Cas9系统基因编辑的机制
        2.4 CRISPR/Cas9系统的脱靶效应
    3 昆虫的嗅觉感器及嗅觉感受机制
    4 昆虫普通气味结合蛋白的研究进展
    5 斜纹夜蛾及其发生,危害和防治的研究
        5.1 斜纹夜蛾的生物学和生态学特征
        5.2 斜纹夜蛾的为害特征
        5.3 斜纹夜蛾的防治
    6 本研究的目的和意义
第二章 利用CRISPR/CAS9系统敲除斜纹夜蛾GOBP2基因
    1 实验材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 实验结果
        2.1 靶标位点的选择及sgRNA和Cas9 mRNA的合成
        2.2 卵的注射及突变检测
        2.3 突变单对系的筛选
        2.4 脱靶效应的检测
    3 讨论
第三章 SlitGOBP2突变个体触角电位反应的测定
    1 实验材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 实验结果
        2.1 测试个体的基因型检测
        2.2 触角电位反应
    3 讨论
全文总结
参考文献
附录:攻读硕士学位期间学术论文的发表情况
致谢



本文编号：3801820