食管癌患者外周血白细胞miRNA标记物及其靶基因表达水平的研究

发布时间：2023-04-29 03:26

　　目的:通过筛选和验证食管癌患者外周血miRNA标记物,预测其靶基因,并检测相应的mRNA及蛋白质在食管癌患者中的表达水平的改变,探讨其异常表达与食管癌可能的关系。方法:以食管癌患者外周血为资源,以健康群体为对照,依托miRNA芯片技术平台,通过对外周血白细胞miRNA谱分析及候选指标的筛选,并以实时荧光定量PCR方法对单一候选miRNA进行大样本验证,确定食管癌患者外周血白细胞中差异表达的miRNA标记物,利用TargetScan、miRDB、PicTar等靶基因预测软件在线预测miRNA可能的靶基因,同时利用Pubmed数据库对其靶基因功能进行检索,筛选出与肿瘤、免疫、细胞周期、细胞增殖、细胞分化相关的靶基因,并应用RT-qPCR、蛋白质印迹法(Western Blot)检测其表达水平的变化。结果:芯片结果显示,与正常对照组比较,食管癌组上调表达miRNA为184种,下调表达miRNA为143种。根据miRNA表达差异倍数、P值等数据,选出其中12种候选miRNA,在32例食管癌、27例健康志愿者标本中,应用RT-qPCR对候选miRNA表达水平进行验证。结果显示,与正常对照组比较发...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
研究内容与方法
1.实验材料
    1.1 实验对象
    1.2 主要仪器设备
    1.3 主要试剂
    1.4 Western Blot主要试剂的配制
2.实验内容与方法
    2.1 实验流程图
    2.2 标本的收集
    2.3 miRNA提取质检过程
    2.4 miRNA谱芯片检测过程
    2.5 引物设计
    2.6 RT-qPCR分析
    2.7 miRNA的靶基因预测
    2.8 靶基因引物设计
    2.9 靶基因mRNA表达的检测
3.Western Blot检测靶基因蛋白水平的表达
4.统计学处理
结果
讨论
小结
问题与展望
致谢
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
导师评阅表



本文编号：3805070