胰蛋白酶原基因突变促进胰腺癌细胞恶性增殖的功能和机制研究

发布时间：2023-05-08 02:48

　　【目的】我国胰腺癌发病率约为6.22/10万,是十大恶性肿瘤之一,生存率位居60种常见肿瘤之末,至今胰腺癌发生的具体机制尚未明确。胰腺癌患者存在胰蛋白酶原基因(Protease Serine 1,PRSS1)突变,而且胰蛋白酶还可作为信号分子激活蛋白酶活化受体-2(Protease activated receptor–2,PAR2)刺激胰腺癌细胞的增殖和粘附,还可以通过降解细胞外基质参与胰腺癌的侵袭和转移。本研究拟在胰腺癌患者的外周血样本中筛查PRSS1基因变异,之后通过细胞、转基因小鼠模型探讨PRSS1常见的突变形式(R116C)对胰腺癌发生、发展的影响。【方法】(1)应用全外显子测序技术对2个胰腺癌高危家系进行筛查,家系内匹配对象分别为:家系1中2例胰腺导管腺癌和3个健康的一级亲属;家系2中1例胰腺导管腺癌、1例慢性胰腺炎和2个健康一级亲属。(2)致病基因数据分析,并结合遗传模式进行致病基因筛选。(3)对可疑的致病基因,设计引物,在散发患者中进行Sangar测序验证。(4)构建PRSS1_R116C突变稳转胰腺癌细胞株(PANC-1)。(5)RNA-SEQ高通...

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

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前言
第一章 胰腺癌相关突变基因的筛查与验证
    引言
    (一) 应用全外显子测序技术筛查胰腺癌可疑的基因突变
        1 材料和方法
        2 分析结果
    (二) 应用Sangar测序法验证胰蛋白酶原基因突变
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
    参考文献
第二章 突变型胰蛋白酶促进胰腺癌细胞增殖转移的研究
    引言
    (一) 过表达PRSS1_R116C慢病毒载体构建和鉴定
        1 过表达慢病毒载体构建
        2 表达检测
    (二) PRSS1_R116C突变对胰腺癌细胞基因表达谱的影响
        1 方法学
        2 结果
        3 讨论
        参考文献
    (三) PRSS1_R116C突变影响胰腺癌细胞增殖和转移的验证
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        参考文献
第三章 胰蛋白酶原基因突变诱导胰腺癌发生的动物模型初探
    引言
        参考文献
    (一) 胰蛋白酶原基因突变转基因小鼠模型构建
    (二) 在体实验验证PRSS1_R116C突变促进胰腺导管上皮不典型增生
        1 PRSS1_R116C基因敲入小鼠的建立
        2 模型的鉴定
        3 讨论
    参考文献
结论
致谢
综述 胰蛋白酶和抗胰蛋白酶失衡造就独特的微环境与肿瘤发生的关系
    参考文献



本文编号：3811832