利用基因工程改造的大肠杆菌合成蒎烯

发布时间：2023-05-10 06:00

　　目的:以大肠杆菌为底盘细胞,利用合成生物学手段导入外源杂合蒎烯合成代谢途径,构建高效合成蒎烯的微生物工厂。方法:将来源于酵母和粪肠球菌的异源杂合甲羟戊酸(MVA)代谢途径和来源于北美巨冷杉的牻牛儿焦磷酸合酶(GPPS)和蒎烯合成酶(PS)基因序列共同导入大肠杆菌,构建催化蒎烯合成的大肠杆菌工程菌。首先优化合成GPPS、PS基因,再分别以pETDuet-1和pET-24a(+)载体为基础构建GPPS、PS共表达和融合表达载体,并分别转化大肠杆菌获得工程菌E.hzh01和E.hzh02,摇瓶培养后利用GC-MS技术检测E.hzh01和E.hzh02的蒎烯产量。进一步获取MVA代谢途径相关酶基因mvaE、mvaS、ERG12、ERG8、ERG19、IDI序列,分别利用多顺反子模型和BioBrick方法构建2种不同方案的异源MVA代谢途径,再将异源MVA代谢途径和GPPS、PS融合表达基因共同转化大肠杆菌,构建完整蒎烯合成代谢工程菌株E.hzh03和E.hzh05。结果:摇瓶培养E.hzh01和E.hzh02的蒎烯产量分别为0.85和1.86 mg/L,结果表明融合表达更有利于蒎烯的合成。E....

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 GPPS-PS表达载体的构建
        1.2.1 目的基因的获取
        1.2.2 构建共表达载体
        1.2.3 构建融合表达载体
        1.2.4 构建共表达及融合表达工程菌
        1.2.5 蒎烯含量检测
    1.3 含MVA途径产蒎烯工程菌构建
        1.3.1 构建MVA上游表达载体
        1.3.2 多顺反子模型原理构建MVA下游表达载体
        1.3.3 BioBrick原理构建MVA下游表达载体
        1.3.4 含MVA代谢途径产蒎烯工程菌的构建
2 结果
    2.1 GPPS-PS表达载体的鉴定
    2.2 蒎烯含量检测方法的建立
    2.3 目的蛋白融合表达可显著提高蒎烯产量
    2.4 MVA上游表达载体p ACYCDuet-mva E/S的鉴定
    2.5 MVA下游表达载体pET24a-ERG12-8-19-IDI的鉴定
    2.6 工程菌产蒎烯能力检测
3 讨论



本文编号：3813180