水稻条斑病菌T3SS基因诱导表达体系的建立

发布时间：2023-06-02 05:04

　　水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染寄主水稻,引起水稻细菌性条斑病(Bacterial leaf streak,BLS),在亚洲水稻种植区引起严重减产。Xoc主要依靠hrp基因簇(T3SS基因)编码的III型分泌系统(type III secretion system,T3SS)将效应蛋白运送到寄主细胞中,并激发水稻的抗(感)性。T3SS作为Xoc关键毒性因子,是Xoc毒性调控网络的重要组成部分,但尚且缺乏有效解析Xoc毒性调控网络的诱导表达体系。为了更好地解析Xoc毒性调控网络,本研究建立了一套从转录水平到蛋白表达水平的Xoc T3SS诱导表达检测体系。为建立T3SS转录水平报道检测体系,本研究利用gusA报道基因构建获得启动子探针载体pHG2-hrpGxoc、pHG2-hrpXoc、pHG1-hrcCxoc。通过启动子GUS活性测定和荧光定量PCR,初步证明了这套转录水平报道检测体系在XOM3诱导条件下运行和解析基因转录调控表达情况。为进一步确定这套体系可以精确分析基因调控表达,将上述启动子探针载体导入调控基因trh、zur、l...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 水稻条斑病和水稻条斑病菌
        1.1.1 水稻条斑病的发现
        1.1.2 水稻条斑病的分布及危害
        1.1.3 水稻条斑病菌
        1.1.4 水稻条斑病的危害及防治方法
    1.2 水稻条斑病菌的毒性因子
        1.2.1 胞外酶类
        1.2.2 胞外多糖
        1.2.3 脂多糖
        1.2.4 Ⅲ型分泌系统和效应蛋白
    1.3 水稻条斑病菌毒性调控网络
        1.3.1 群集感应系统
        1.3.2 环鸟苷二磷酸信号激发的转录调控
        1.3.3 双组份信号转导系统的毒性调控
        1.3.4 hrp基因表达调控系统
        1.3.5 转录后的毒性基因调控
    1.4 T3SS基因表达检测体系的研究进展
        1.4.1 T3SS基因转录表达检测体系的研究进展
        1.4.2 T3SS基因蛋白表达检测体系的研究进展
    1.5 研究内容和意义
第二章 水稻条斑病菌T3SS基因转录水平报道检测体系的建立
    引言
    2.1 材料与方法
        2.1.1 菌株与质粒
        2.1.2 引物设计与合成
        2.1.3 培养基
        2.1.4 菌株的活化、培养和保存
        2.1.5 质粒的提取
        2.1.6 分子遗传操作体系
        2.1.7 过渡载体和骨架载体的构建
        2.1.8 启动子探针载体的构建
        2.1.9 黄单胞菌感受态制备及电转化
        2.1.10 实验作物品种与生长条件
        2.1.11 注射接种
        2.1.12 XOM3 诱导条件下的GUS活性定量测定
        2.1.13 植物组织中的GUS染色方法
        2.1.14 植物组织中的GUS活性定量测定方法
        2.1.15 植物组织中细菌生长量的测定
        2.1.16 实时荧光定量PCR
    2.2 结果与分析
        2.2.1 T3SS基因启动子探针载体的构建
        2.2.2 T3SS基因启动子活性的诱导表达检测
        2.2.3 启动子探针载体应用于基因调控表达的分析
        2.2.4 已知毒性调控子基因调控T3SS基因表达的分析
        2.2.5 启动子探针载体应用于植物组织中基因表达调控的分析
    2.3 讨论
第三章 水稻条斑病菌T3SS基因蛋白表达检测体系的建立
    引言
    3.1 材料与方法
        3.1.1 菌株与质粒
        3.1.2 引物设计与合成
        3.1.3 培养基
        3.1.4 菌株的活化、培养和保存
        3.1.5 质粒的提取
        3.1.6 分子遗传操作体系
        3.1.7 过渡载体和骨架载体的构建
        3.1.8 蛋白表达载体的构建
        3.1.9 黄单胞菌感受态制备及电转化
        3.1.10 实验作物品种与生长条件
        3.1.11 注射接种
        3.1.12 蛋白免疫杂交技术(Western blot)
    3.2 结果与分析
        3.2.1 T3SS基因蛋白表达载体的构建
        3.2.2 T3SS蛋白表达检测体系的建立
        3.2.3 T3SS蛋白表达检测体系应用于毒性调控网络的分析
        3.2.4 T3SS蛋白表达检测体系应用于基因功能互补的分析
    3.3 讨论
第四章 全文总结与展望
    4.1 总结
    4.2 创新点
    4.3 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文



本文编号：3827723