牙鲆FEL1基因的表达及功能分析

发布时间：2023-06-03 17:14

　　凝集素(Lectin)是一类能与糖进行非共价可逆结合的蛋白质,具有凝集细胞和聚糖的作用。在牙鲆的集约化养殖过程中,会面临许多病原微生物的入侵,造成大量的经济损失,研究表明鱼卵凝集素(Fish egg lectin)是凝集素超家族中的一员,在硬骨鱼的抗菌免疫反应中发挥作用。在本研究中,克隆验证了牙鲆FEL1基因(Fish egg lectin 1,PoFEL1),其中开放阅读框(Open reading frame, ORF)为675 bp,编码224个氨基酸,蛋白分子量为24.8 kDa。PoFEL1组织表达分析显示,PoFEL1在卵巢、肠以及肝脏中的表达量比较高;胚胎发育过程中PoFEL1表达分析显示,在胚胎发育的早期PoFEL1的表达量比较高,随着胚胎的逐渐成熟,其表达量逐渐降低,呈母源性表达。体外细胞刺激实验表明LPS、PGN、Poly(I∶C)和E.tarda刺激牙鲆卵巢细胞系后,PoFEL1的表达上调。利用牙鲆卵巢细胞研究了PoFEL1蛋白的亚细胞定位,证实其分布在细胞质中。用LPS刺激过表达PoFEL1的牙鲆卵巢细胞系,发现细胞因子p38、IL-6和TNF-α的表达显著上调...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 模板来源
        1.1.3 细胞系来源
    1.2 实验方法
        1.2.1
        1.2.2 PoFEL1序列分析
        1.2.3 PoFEL1组织表达分析
        1.2.4 PoFEL1胚胎发育模式表达分析
        1.2.5 牙鲆p-EGFP-FEL1质粒构建
        1.2.6 体外细胞刺激实验
        1.2.7 PoFEL1过表达实验
        1.2.8 pRL-TK质粒、NF-κB荧光素酶质粒与重组质粒共转染293T细胞
        1.2.9 实时荧光定量(qRT-PCR)
        1.2.10 数据处理
2 实验结果
    2.1 PoFEL1序列分析
        2.1.1 PoFEL1的ORF序列扩增
        2.1.2 PoFEL1的系统进化分析
    2.2 PoFEL1的组织表达分析
    2.3 PoFEL1的发育表达模式分析
    2.4 免疫刺激牙鲆卵巢细胞系后PoFEL1的mRNA表达水平分析
    2.5 过表达PoFEL1对p38,IL-6,TNF-α等细胞因子的调节作用
    2.6 PoFEL1的亚细胞定位
    2.7 过表达PoFEL1对NF-κB的影响
3 讨论



本文编号：3829713