S100β基因单核苷酸多态性对miRNA靶向调控的影响

发布时间：2023-06-05 20:53

　　目的探讨中枢神经特异蛋白(S100β)基因单核苷酸多态性对微小RNA(miRNA)靶向调控的影响。方法利用Target Scan在线软件,寻找调控S100β基因的miRNA及其配对结合位点。构建S100β基因rs9722位点不同基因型载体并鉴定。将构建的S100β基因rs9722位点不同基因型载体(S100β-rs9722C、S100β-rs9722T、S100β-rs9722Cmut)与miRNA模拟物(miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p)两两组合共转染293T细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组合培养液上清荧光素酶活性。取对数生长期人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分别转染miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p,采用实时荧光定量PCR法检测相应miRNA表达,采用Western blotting法检测S100β表达。结果 miR-340-3p、miR-6827-3p的5’-CUCUGCC-3’序列与S100β基因3’非编码区(3’UTR)的5’-GAGACGG-3’序...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 miRNA与S100β基因靶向调控关系预测
    1.3 S100β基因rs9722位点不同基因型载体构建
    1.4 双荧光素酶活性检测
    1.5 细胞转染
    1.6 miRNA表达检测
    1.7 S100β表达检测
    1.8 统计学方法
2 结果
    2.1 miRNA与S100β基因的靶向调控关系
    2.2 S100β基因rs9722位点不同基因型载体鉴定
    2.3 各组双荧光素酶活性比较
    2.4 各组转染后相应miRNA表达比较
    2.5各组转染后S100β表达比较
3 讨论



本文编号：3832032