噬琼胶假交替单胞菌胞外多糖对环境因子扰动的变构调节及转录组基因表达差异分析

发布时间：2023-08-04 20:25

　　微生物胞外多糖是由微生物生产并分泌到胞外的一种糖类聚合物,在不断变化的海洋环境中,胞外多糖的分泌可以减轻外界环境扰动对微生物自身的伤害,提高微生物存活的能力。本课题以噬琼胶假交替单胞菌Pseudoalteromonas agarivorans Hao2018为研究对象,分别改变温度和发酵初始p H,提取并纯化了其所产的胞外多糖。通过高效液相色谱法和傅里叶红外光谱法对胞外多糖单糖组成、糖环形式和糖苷键构型进行测定,分析了环境因子扰动对胞外多糖产量和结构的影响,之后以胞外多糖对羟基、DPPH和ABTS三种自由基的清除能力为指标,对其抗氧化活性进行评价比较。最后对发酵初始p H7(S157)和p H9(S159)条件下的噬琼胶假交替单胞菌Hao2018进行了转录组测序,对比分析了双组分系统相关基因,细菌趋化性相关基因及胞外多糖合成相关基因的表达量情况。课题研究结果如下:温度和发酵初始p H会对噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖粗品的产量产生影响,胞外多糖主要由葡萄糖、甘露糖和鼠李糖组成,其中甘露糖和鼠李糖的比例随着温度的升高呈现先降低后升高的趋势,随着发酵初始p H的升高呈现一直降低趋...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 海洋细菌胞外多糖
        1.1.1 海洋环境中胞外多糖产生菌
        1.1.2 海洋细菌胞外多糖初级结构分析
        1.1.3 海洋细菌胞外多糖的生态意义
    1.2 抗氧化活性
        1.2.1 自由基概念
        1.2.2 抗氧化活性的测定方法
    1.3 转录组测序技术
    1.4 立题依据及研究内容
        1.4.1 立题依据
        1.4.2 研究内容
        1.4.3 技术路线
第2章 环境因子扰动对噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖结构的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株与培养基
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 仪器和设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖的制备
        2.2.2 Sevag法除蛋白
        2.2.3 DEAE-52纤维素离子交换层析
        2.2.4 Sephadex G-100 葡聚糖凝胶柱层析
        2.2.5 透析及冷冻干燥
        2.2.6 噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖的单糖组成分析
        2.2.7 噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖的红外光谱分析
    2.3 实验结果及讨论
        2.3.1 环境因子扰动对噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖粗品产量的影响
        2.3.2 环境因子扰动对噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖单糖组成的影响
        2.3.3 环境因子扰动下噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖的红外光谱分析
    2.4 本章小结
第3章 环境因子扰动对噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖的抗氧化活性的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 羟自由基清除能力测定
        3.2.2 DPPH自由基清除能力测定
        3.2.3 ABTS自由基清除能力测定
    3.3 实验结果与讨论
        3.3.1 环境因子扰动对噬琼胶假交替单胞菌Hao2018胞外多糖羟自由基清除能力的影响
        3.3.2 环境因子扰动对噬琼胶假交替单胞菌Hao2018 胞外多糖DPPH自由基清除能力的影响
        3.3.3 环境因子扰动对噬琼胶假交替单胞菌Hao2018 胞外多糖ABTS自由基清除能力的影响
    3.4 本章小结
第4章 噬琼胶假交替单胞菌Hao2018转录组基因表达差异分析
    4.1 材料
        4.1.1 测序样品的制备
    4.2 实验方法
        4.2.1 RNA提取及检测
        4.2.2 cDNA文库构建及测序
        4.2.3 原始数据整理、过滤及质量评估
        4.2.4 比对分析
        4.2.5 表达量分析
        4.2.6 差异表达分析
        4.2.7 GO富集分析
        4.2.8 KEGG富集分析
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 测序数据整理、过滤及质量评估
        4.3.2 比对分析
        4.3.3 表达量分析
        4.3.4 差异表达分析
        4.3.5 GO富集分析
        4.3.6 KEGG富集分析
        4.3.7 双组分系统及细菌趋化性相关基因表达情况分析
        4.3.8 胞外多糖合成基因表达情况分析
    4.4 本章小结
第5章 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 展望
参考文献
致谢
在学期间主要科研成果



本文编号：3838941