EPO基因修饰的骨髓间充质干细胞在哮喘气道重塑中的作用及机制

发布时间：2023-08-06 19:42

　　目的:气道重塑被认为是支气管哮喘治疗的重点与难点,但遗憾的是目前尚无有效的措施来逆转或预防气道重塑。研究发现促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)具有组织细胞保护作用和气道重塑拮抗效应,但正常时体内表达量非常低,不足以拮抗致气道重塑因素。已证实骨髓间充质干细胞(MSCs)可改善哮喘气道重塑,而且EPO基因修饰骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,MSCs)后,MSCs的增殖、迁移能力显著增强。因此本研究采用EPO基因修饰的MSCs(EPO-MSCs)干预慢性哮喘小鼠模型,观察EPO-MSCs对哮喘气道重塑的影响。方法:(1)构建过表达EPO基因的慢病毒载体系统,再用该病毒载体转染MSCs,对构建成功的过表达EPO基因的MSCs稳转株用Real-Time和Western blot检测EPO的表达情况。(2)用MSCs或EPO-MSCs干预卵清蛋白(OVA)诱导的慢性哮喘小鼠模型。干预后,通过瑞氏染色观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和炎性细胞数(嗜酸性粒细胞)的变化;ELISA法测定肺组织匀浆中炎性...

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
    一、气道重塑的机制及其影响因素
        1.支气管哮喘的气道重塑
        2.气道重塑的发生机制
        3.气道重塑的防治对策
    二、促红细胞生成素的生物学作用
        （1）促红细胞生成素
        （2）促红细胞生成素受体
        （3）EPO在哮喘气道重塑中作用的调控机制
    三、间充质干细胞与气道重塑
    四、促红细胞生成素在哮喘气道重塑中的作用
    六、促红细胞生成素基因修饰间充质干细胞治疗的可行性
    七、存在的问题及我们的研究假设
第一部分EPO基因修饰的骨髓间充质干细胞稳定株构建
    1 材料
        1.1 过表达载体信息
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 细胞株
    2 方法
        2.1 构建EPO基因过表达载体
        2.2 慢病毒的包装和病毒滴度的测定
        2.3 慢病毒转染MSCs，构建稳转株
    3 结果
        3.1 构建EPO基因过表达载体
        3.2 慢病毒的包装和病毒滴度的测定
        3.3 慢病毒转染MSCs，构建稳转株
    4 讨论
第二部分EPO基因修饰的MSCS对哮喘气道重塑的影响
    1 材料
        1.1 EPO基因修饰的MSCs分化鉴定
        1.2 建立慢性哮喘气道重塑模型及EPO-MSCs干预
        1.3 气道重塑组织病理学和相关细胞因子的变化
    2 方法
        2.1 EPO基因修饰的MSCs分化鉴定
        2.2 建立慢性哮喘气道重塑模型及EPO-MSCs干预
        2.3 气道重塑组织病理学和相关细胞因子的变化
    3 结果
        3.1 EPO基因修饰的MSCs分化鉴定
        3.2 建立慢性哮喘气道重塑模型及EPO-MSCs干预
        3.3 气道重塑组织病理学和相关细胞因子的变化
    4 讨论
第三部分EPO基因修饰的MSCS对哮喘气道重塑影响的机制
    1 材料
        1.1 Real-Time PCR检测TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路m RNA的表达
        1.2 Western Blot检测TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路蛋白的表达
        1.3 配制缓冲液
    2 方法
        2.1 Real-Time PCR检测TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路m RNA的表达
        2.2 Western Blot检测TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路蛋白的表达
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 Real-Time PCR检测TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路m RNA的表达
        3.2 Western Blot检测TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路蛋白的表达
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：3839940