金纳米载体介导的肿瘤靶向沉默PD-L1基因联合光热效应治疗黑色素瘤的研究

发布时间：2023-08-17 19:32

　　目的:肿瘤细胞表面高表达的PD-L1分子,是一种起负调控作用的免疫抑制分子,通过与T淋巴细胞表面的PD-1分子相互作用,导致T细胞免疫应答功能受到抑制,并使CD8+T淋巴细胞的抗肿瘤功能减弱。在本研究中,我们应用FA-GNRsiPD-L1沉默肿瘤细胞PD-L1的表达,进而阻断PD-L1与PD-1之间的相互作用,恢复CD8+T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,从而提高免疫应答能力。通过联合FA-GNR的光热作用,探讨靶向肿瘤的PD-L1基因沉默免疫治疗协同光热治疗对B16-BL6黑色素瘤小鼠的治疗效果。方法:1.琼脂糖凝胶阻滞实验检测FA-GNR对siRNA的负载能力。2.MTT法检测FA-GNR的细胞毒性。3.流式细胞术及荧光倒置显微镜观察负载Cy3-siGAPDH的FA-GNR对黑色素瘤细胞B16-BL6的转染效率。4.q-PCR及流式细胞术检测FA-GNR-siPD-L1对B16-BL6细胞PD-L1基因/蛋白的沉默效果。5.siPD-L1沉默后的B16-BL6黑色素瘤细胞与B16-BL6黑色素瘤荷瘤C57BL/6小鼠的T细胞混合培养,q-PCR检测T细胞上免疫抑制分子PD-1、TIM...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验动物、试剂与设备
        2.1.1 实验动物及细胞株
        2.1.2 主要的实验试剂
        2.1.3 主要的实验设备
        2.1.4 主要的试剂配制
    2.2 体外实验
        2.2.1 金纳米棒的合成、修饰与表征
        2.2.2 FA-GNR对siRNA载药量的检测
        2.2.3 细胞培养
        2.2.4 MTT检测修饰前后金纳米棒的细胞毒性
        2.2.5 FA-GNR-Cy3-GAPDH对B16-BL6细胞的转染效率
        2.2.6 FA-GNR-siPD-L1体外沉默效果的检测
        2.2.7 B16-BL6细胞肿瘤抗原的制备
        2.2.8 混合淋巴细胞培养
        2.2.9 q-PCR检测沉默PD-L1的B16-BL6细胞对T细胞耗竭表型变化的影响及细胞因子的分泌情况
        2.2.10 Annexin V/PI染色法检测沉默PD-L1的B16-BL6细胞对T细胞凋亡的影响
    2.3 体内实验
        2.3.1 FA-GNR-siPD-L1与光热效应协同治疗黑色素瘤荷瘤小鼠
        2.3.2 流式细胞术检测T细胞耗竭表型变化
        2.3.3 Annexin V/PI染色法检测小鼠体内T细胞的凋亡情况
        2.3.4 q-PCR检测细胞因子的分泌情况
        2.3.5 CCK8检测T细胞增殖
        2.3.6 LDH试剂盒检测小鼠CD8+细胞的细胞毒杀伤作用
    2.4 统计学分析
第3章 结果
    3.1 FA-GNR的合成、表征及功能化检测
    3.2 FA-GNR-Cy3-GAPDH转染效率的确定
    3.3 FA-GNR-siPD-L1的体外沉默效果
    3.4 PD-L1基因沉默对T细胞耗竭表型的影响及细胞因子的分泌情况
    3.5 PD-L1基因沉默对T细胞凋亡的影响
    3.6 FA-GNR-siPD-L1与光热效应协同治疗黑色素瘤荷瘤小鼠的效果
    3.7 FA-GNR-siPD-L1治疗后T细胞耗竭表型变化
    3.8 FA-GNR-siPD-L1治疗后小鼠体内T细胞的凋亡情况
    3.9 FA-GNR-siPD-L1治疗后体内沉默效果
    3.10 FA-GNR-siPD-L1治疗后细胞因子的分泌情况
    3.11 FA-GNR-siPD-L1治疗后T细胞增殖能力
    3.12 FA-GNR-siPD-L1治疗后CD8+T淋巴细胞的细胞毒杀伤作用
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
综述
    参考文献



本文编号：3842450