转sm-Nvas基因抗稻瘟病水稻sm-YTB的研究

发布时间：2023-09-16 08:59

　　sm-Nvas是来自烟草的受水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)双重诱导的植物维管束特异表达的新基因,本文主要研究转sm-Nvas基因水稻的子代遗传稳定性、在转基因水稻中的整合位点和转基因株系对稻瘟病的抗病性。取得如下研究结果:1.连续两年种植15个转sm-Nvas基因水稻家系,提取两代家系的基因组DNA用于sm-Nvas基因和转基因标记检测。有4个家系无sm-Nvas基因和潮霉素抗性基因,但有转基因载体部分原件。10个家系中有sm-Nvas基因及载体原件,它们在2代中都能稳定遗传,1个家系还处于分离状态。2.在转sm-Nvas基因阳性家系中,使用TAIL-PCR方法进行T-DNA侧翼序列分析以确定sm-Nvas基因在水稻基因组的插入位点。确定有8个转基因家系sm-Nvas定位在水稻第6号染色体中,在这些株系中,有一个株系有转基因杂合子株,其余株系是转基因纯合子。3.对已经定位的转sm-Nvas基因阳性植株的农艺性状的对比研究,发现转sm-Nvas基因植株较转基因受体品种除具有更好的水稻稻瘟病抗性外,且分蘖能力也更强。

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 水稻抗稻瘟病研究
        1.1.1 水稻稻瘟病及其生活史
        1.1.2 水稻抗稻瘟病基因资源
        1.1.3 水稻抗稻瘟病基因的克隆及其应用
        1.1.4 非水稻植物来源抗稻瘟病基因的克隆及应用
    1.2 转基因抗稻瘟病水稻育种研究
        1.2.1 转基因植物育种流程及安全评价
        1.2.2 转基因抗稻瘟病水稻育种的研究进展
    1.3 非水稻植物来源抗稻瘟病基因sm-Nvas及其应用
    1.4 本研究的意义
第二章 外源基因sm-Nvas在转基因植株后代中的遗传稳定性检测
    2.1 引言
    2.2 实验材料与试剂
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 实验试剂
        2.2.4 试剂配制
        2.2.5 引物序列
    2.3 实验方法
        2.3.1 转sm-Nvas基因水稻种植
        2.3.2 CTAB法提取转sm-Nvas基因水稻总DNA(小量)
        2.3.3 转sm-Nvas基因水稻阳性鉴定
        2.3.4 转sm-Nvas基因水稻中转基因标记物的分子检测
    2.4 结果与分析
        2.4.1 转sm-Nvas基因水稻阳性鉴定
        2.4.2 pCAMBIAI1305.1∷sm-Nvas载体质粒检测引物
        2.4.3 转sm-Nvas基因水稻中转基因标记物分子检测
    2.5 讨论
第三章 转基因水稻中sm-Nvas在YTB中整合位点分析
    3.1 引言
    3.2 实验材料与试剂
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 实验试剂
        3.2.4 试剂配制
        3.2.5 引物序列
    3.3 实验方法
        3.3.1 CTAB法提取转sm-Nvas基因水稻总DNA
        3.3.2 外源sm-Nvas基因整合位点检测
        3.3.3 TAIL-PCR产物纯化、克隆和测序
        3.3.4 T-DNA侧翼序列的验证
        3.3.5 T-DNA整个位点纯合性检测
    3.4 结果与分析
    3.5 讨论
第四章 转sm-Nvas基因水稻稻瘟病抗性分析
    4.1 引言
    4.2 实验材料与试剂
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 实验仪器
        4.2.4 试剂配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 转sm-Nvas基因植株的种植
        4.3.2 转sm-Nvas基因水稻总DNA的提取
        4.3.3 转sm-Nvas基因水稻阳性鉴定
        4.3.4 转sm-Nvas基因植株的稻瘟病抗性鉴定
    4.4 结果与分析
        4.4.1 转sm-Nvas基因植株阳性鉴定
        4.4.2 转sm-Nvas基因植株抗病性鉴定
    4.5 讨论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
硕士期间参与的研究项目及学术会议



本文编号：3846711