黄瓜CsTCTP1和CsTCTP2基因在拟南芥中的遗传转化及功能分析

发布时间：2023-09-29 05:11

　　黄瓜(Cucumis sativus)是我国主要的设施蔬菜之一,其在生产上持续地遭受白粉病菌[Sphaerotheca fuliginea(Schlecht)Poll.]等病原菌的侵染,造成大面积减产。本实验室前期研究表明,翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)可能负调控黄瓜抗白粉病。本研究首先通过CsTCTP1和CsTCTP2基因异源转化拟南芥,获得CsTCTP1/CsTCTP2基因恢复系植株和过表达系植株,其次,对不同品系的拟南芥表型进行分析,明确CsTCTP1/CsTCTP2基因对植株生长发育的影响;同时,通过对不同品系拟南芥接种白粉病菌,揭示CsTCTP1/CsTCTP2基因在拟南芥响应白粉病菌(Golovinomyces cichoracearum)侵染中的作用,初步探究了CsTCTP1/CsTCTP2基因在调控拟南芥响应白粉病菌侵染过程中参与的信号途径。本研究将为深入研究黄瓜CsTCTP在平衡调控植物生长发育与免疫响应中作用及机制提供有益的证据。主要研究结果如下:1.将构建完成的CsTCTP1/CsTC...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 植物TCTP的分子特征
    1.2 植物TCTP表达模式
    1.3 植物TCTP的生物学功能
        1.3.1 TCTP对植物生长发育的影响
            1.3.1.1 调控细胞增殖
            1.3.1.2 调控侧根形成
            1.3.1.3 调控果实成熟
            1.3.1.4 调控细胞凋亡
        1.3.2 TCTP在植物非生物胁迫中的作用
            1.3.2.1 干旱胁迫
            1.3.2.2 温度胁迫
            1.3.2.3 盐胁迫
            1.3.2.4 金属离子胁迫
            1.3.2.5 其它非生物胁迫
        1.3.3 TCTP在植物生物胁迫中的作用
            1.3.3.1 病原菌和病毒的侵染
            1.3.3.2 昆虫侵袭
    1.4 本研究的目的和意义
    1.5 技术路线
第二章 CsTCTP1和CsTCTP2 在拟南芥中的遗传转化
    2.1 试验材料
        2.1.1 载体及菌株
        2.1.2 植物材料
        2.1.3 试剂配制
        2.1.4 引物合成
    2.2 方法
        2.2.1 稳定遗传转化WT拟南芥
        2.2.2 过表达转基因植株筛选
        2.2.3 拟南芥叶片DNA提取
        2.2.4 拟南芥叶片RNA提取
        2.2.5 拟南芥c DNA的合成
        2.2.6 转基因植株的检测
        2.2.7 RT-PCR法鉴定恢复株系与过表达株系纯合体
    2.3 结果与分析
        2.3.1 转基因植株的筛选
        2.3.2 转基因植株的分子鉴定
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第三章 CsTCTP1和CsTCTP2 基因对拟南芥生长发育的影响
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 拟南芥种子处理
        3.2.2 种子萌发率统计及根长检测
        3.2.3 拟南芥的形态观察
        3.2.4 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)
    3.3 结果与分析
        3.3.1 CsTCTP1和CsTCTP2 基因对拟南芥萌发及根长的影响
        3.3.2 CsTCTP1和CsTCTP2 基因对拟南芥萌莲座叶形态的影响
        3.3.3 CsTCTP1和CsTCTP2 基因对拟南芥株高及果荚的影响
        3.3.4 CsTCTP1和CsTCTP2 基因对拟南芥生长周期的影响
        3.3.5 拟南芥内源基因的表达变化
    3.4 讨论
        3.4.1 CsTCTP1和CsTCTP2 基因对植物生长发育的影响
        3.4.2 CsTCTP1和CsTCTP2 基因参与的信号通路分析
    3.5 本章小结
第四章 CsTCTPs在拟南芥响应白粉病菌胁迫中的功能分析
    4.1 材料
    4.2 方法
        4.2.1 拟南芥接种白粉病菌
        4.2.2 拟南芥病情指数调查
        4.2.3 RT-qPCR
    4.3 结果与分析
        4.3.1 转基因拟南芥对白粉病的抗性鉴定
        4.3.2 CsTCTP1和CsTCTP2 基因对TOR信号的调控
        4.3.3 CsTCTP1 基因对ABA信号的调控
        4.3.4 CsTCTP1 基因对防御相关基因的表达调控
    4.4 讨论
        4.4.1 转基因拟南芥对白粉病的抗性分析
        4.4.2 CsTCTP1和CsTCTP2 在拟南芥响应白粉病菌侵染中的作用
    4.5 本章小结
总结与展望
参考文献
致谢
攻读学位期间发表学术论文



本文编号：3849351