甘蓝型油菜BnaLCR78基因的初步研究

发布时间：2023-11-11 08:13

　　油菜种子发育与油脂的合成代谢是一个复杂的网络调控系统。本研究以实验室早期获得的一个在油菜种子发育后期表达的功能未知基因——BnaLCR78为研究对象,利用生物信息学方法、分子生物学、分子遗传学等技术手段,对该基因结构与功能进行了初步研究,获得了如下研究结果:1.通过生物信息学分析发现BnaLCR78在甘蓝型油菜A组和C组中分别存在1个拷贝,BnaLCR78.A基因全长531 bp,BnaLCR78.C基因全长538 bp,两个基因具有相同的CDS序列,共237 bp,编码78个氨基酸,其蛋白质含有一个信号肽,推测为分泌蛋白,且含有一个跨膜结构域,与拟南芥LCR家族同源。2.通过RT-PCR分析BnaLCR78在甘蓝型油菜中的表达模式,结果显示BnaLCR78基因在根、茎、叶、花中均不表达,在果荚中痕量表达,在种子中稳定表达。通过进一步的组织化学染色分析,发现BnaLCR78基因在种子的子叶中特异性表达。3.成功构建了一系列载体:组成型启动子35S和种子特异型启动子napin启动的过表达载体35S::BnaLCR78、Pnapin::BnaLCR78;干扰载体35S::BnaLCR78R...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 国内外研究进展
        1.2.1 油菜油脂研究进展
        1.2.2 LCR基因家族的研究进展
        1.2.3 CRISPR/Cas9 基因编辑技术研究进展
    1.3 研究目标与研究内容
        1.3.1 研究目标
        1.3.2 研究内容
    1.4 研究目的与意义
    1.5 技术路线
第二章 甘蓝型油菜Bna LCR78 基因生物信息学分析
    2.1 实验方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 BnaLCR78 基因的理化性质、亲疏水性分析
        2.2.2 BnaLCR78 信号肽预测分析及亚细胞定位预测
        2.2.3 BnaLCR78 蛋白质结果预测
        2.2.4 BnaLCR78 基因启动子元件分析
        2.2.5 BnaLCR78 蛋白的进化关系和分类
    2.3 讨论
第三章 Bna LCR78 基因GUS融合表达载体构建及组织表达分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 甘蓝型油菜“XY15”表达模式分析
        3.2.2 P78::GUS融合表达载体构建
        3.2.3 转基因拟南芥的筛选与PCR检测
        3.2.4 转基因植株的GUS染色结果
    3.3 讨论
第四章 Bna LCR78 基因过表达、干扰、敲除载体构建
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 35S::Bna LCR78与Pnapin::Bna LCR78 过表达载体构建
        4.2.2 35S::Bna LCR78RNAi与 Pnapin::Bna LCR78RNAi载体构建
        4.2.3 pYLCRISPR/Cas9-78 载体构建
        4.2.4 sg RNA-Cas9-78 载体构建
    4.3 讨论
第五章 甘蓝型油菜“湘油15”的遗传转化
    5.1 材料与方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 结果与分析
        5.2.1 油菜转基因植株获得
        5.2.2 转基因植株分子检测结果
        5.2.3 转基因植株突变频率与类型
    5.3 讨论
第六章 全文总结和创新点
    6.1 全文总结
    6.2 创新点
参考文献
附录Ⅰ
附录Ⅱ
致谢
作者简历



本文编号：3862259