番茄SlTIP-1基因的克隆、表达及启动子活性分析

发布时间：2024-09-29 20:39

　　 为研究水孔蛋白分子功能,本研究以番茄(Solanum lycopersicum)矮化品种‘Micro-Tom’为材料,采用RTPCR技术克隆得到1个液泡膜内在蛋白(tonoplast intrinsic proteins, TIPs)类的水孔蛋白基因,命名为SlTIP-1,其开放阅读框(ORF)长753 bp,编码250个氨基酸。基因结构分析发现SlTIP-1有3个外显子和2个内含子。生物信息学分析表明SlTIP-1蛋白含有6个跨膜区及2个NPA (天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸)基序,具有MIP超家族典型的蛋白保守区序列特征。系统进化分析表明, SlTIP-1蛋白与野生种潘那利番茄TIP共聚于一支。实时定量PCR结果表明, SlTIP-1在番茄根中特异性表达。将SlTIP-1基因起始密码子上游1 085 bp的序列构建到植物表达载体pBI121中,转化拟南芥(Arabidopsis thaliana)并进行GUS组织化学染色分析。结果表明, SlTIP-1基因启动子驱动GUS基因在拟南芥根部特异性表达,与实时定量PCR结果一致。本研究拟为进一步探索该基因的功能及番茄分子辅助育种提供理论依据...

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

图1pBI121-pSlTIP-1表达载体示意图

SlTIP-1相对分子质量为25075.27Da,等电点(pI)为5.67,不稳定指数、脂肪族指数和总平均疏水性分别为28.15、114.8和0.950。该蛋白由20种氨基酸组成,含量最高的3位分别是:丙氨酸(Ala)15.6%、甘氨酸(Gly)14.4%和亮氨酸(Leu)1....

图2SlTIP-1基因的克隆

图6SlTIP-1与相关物种TIP蛋白的系统发育分析3讨论

图5SlTIP-1与其他植物中TIP氨基酸序列的同源性比较

AQPs属于多基因家族,番茄基因组中共有44个AQPs,分别属于TIP、PIP、NIP和SIP4个亚家族,其中TIPs按照种类多少又分为TIP2、TIP5、TIP4、TIP1和TIP3五个不同的群(李菲等2018)。本研究从番茄根系中克隆获得AQPs基因SlTIP-1,生物信....

图3SlTIP-1蛋白跨膜结构域分析

图8pBI121-pSITIP-1表达载体的构建图10pSlTIP-1启动子GUS表达模式分析

本文编号：4006301