PTEN基因在小鼠乳腺癌和恶性黑色素瘤增殖及转移中的作用研究

发布时间：2023-11-14 18:39

　　背景:侵袭和转移是恶性肿瘤最主要的死亡原因,乳腺癌和恶性黑色素瘤为常见高侵袭转移性肿瘤。研究表明,抑癌基因PTEN突变或表达缺失显著增强肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移能力,肿瘤微环境基质细胞PTEN功能状态同样极大地影响着肿瘤的发生、发展、侵袭和转移功能。荷瘤宿主整体PTEN降低或缺失是否会促进肿瘤细胞的增殖、远处转移和转移癌的形成,迄今鲜有研究报道。目的:研究PTEN功能抑制或缺失对小鼠乳腺癌细胞和恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭和转移能力的作用;研究荷瘤小鼠PTEN受抑时能否促进乳腺癌和恶性黑色素瘤的增殖和远处转移能力。方法:采用PTEN特异性抑制剂VO-Ohpic处理小鼠乳腺癌4T1细胞和恶性黑色素瘤B16细胞,MTT比色法和集落形成法检测细胞的增殖活性,细胞划痕愈合法和Transwell实验分别测定细胞的迁移及侵袭能力,流式细胞术测定细胞周期时相分布,实时荧光定量RT-PCR法和Western blotting法检测PTEN基因及相关蛋白的表达水平。BALB/c小鼠和C57BL/6J小鼠分别接种4T1细胞和B16细胞,分别建立小鼠乳腺癌、恶性黑色素瘤的原位移植瘤模型和转移瘤模型,小...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 PTEN基因与恶性肿瘤的增殖和转移
    1 PTEN基因的结构与功能
        1.1 PTEN基因的结构
        1.2 PTEN基因的功能
            1.2.1 抑制细胞增殖,促进细胞凋亡
            1.2.2 抑制细胞的粘附和迁移功能
            1.2.3 诱导细胞周期阻滞
            1.2.4 抑制新生血管生成
            1.2.5 调控胚胎的正常发育
            1.2.6 其它
    2 PTEN基因相关的调控信号通路
        2.1 PTEN/Pl3K/AKT/mTOR信号通路
        2.2 PTEN/FAK/p130cas信号通路
        2.3 PTEN/ERK/MAPK信号通路
        2.4 其它信号通路
    3 PTEN基因与肿瘤细胞增殖
    4 PTEN基因与肿瘤细胞凋亡
    5 PTEN基因与肿瘤浸润转移
    6 PTEN基因与肿瘤耐药性
    7 PTEN基因与肿瘤微环境
    8 小结与展望
第二章 PTEN抑制乳腺癌细胞的增殖和转移能力
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 仪器与试剂
            2.1.1 主要实验仪器
            2.1.2 主要试剂与耗材
            2.1.3 常用缓冲液、试剂的配制及准备
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养和动物饲养
            2.2.2 细胞增殖活性的检测和观察
                2.2.2.1 MTT法检测4T1的增殖活性
                2.2.2.2 细胞集落形成法观察细胞的增殖活性
            2.2.3 定量RT-PCR检测PTEN基因的表达
                2.2.3.1 引物序列
                2.2.3.2 细胞内总RNA抽提
                2.2.3.3 cDNA合成
                2.2.3.4 实时荧光定量PCR检测
            2.2.4 细胞侵袭和迁移检测
                2.2.4.1 Transwell小室实验观察细胞的侵袭及迁移
                2.2.4.2 细胞划痕法检测细胞迁移
            2.2.5 FCM检测细胞周期
            2.2.6 Western-blotting法测定相关蛋白的表达
                2.2.6.1 蛋白样品制备
                2.2.6.2 BCA法对蛋白质进行定量
                2.2.6.3 SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白
                2.2.6.4 转膜
                2.2.6.5 封闭及抗体孵育
                2.2.6.6 ECL发光显色及分析
            2.2.7 动物实验
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 VO-Ohpic有效抑制乳腺癌4T1 细胞PTEN表达
        3.2 PTEN功能降低促进乳腺癌4T1细胞的增殖
        3.3 抑制PTEN增强乳腺癌4T1细胞的迁徙和侵袭能力
        3.4 抑制PTEN可活化PI3K/AKT信号通路
        3.5 4T1细胞PTEN功能受抑促进其在体内的生长与转移
        3.6 小鼠机体PTEN功能受抑促进乳腺癌的生长与转移
    4 讨论
    小结
第三章 PTEN抑制恶性黑色素瘤细胞的增殖和转移能力
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 仪器与试剂
            2.1.1 主要实验仪器
            2.1.2 主要试剂与耗材
            2.1.3 常用缓冲液、试剂的配制及准备
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养和动物饲养
            2.2.2 细胞增殖活性的检测和观察
                2.2.2.1 MTT法检测B16细胞的增殖活性
                2.2.2.2 结晶紫染色观察B16细胞的增殖活性
            2.2.3 定量RT-PCR检测PTEN基因的表达
                2.2.3.1 引物序列
                2.2.3.2 细胞内总RNA抽提
                2.2.3.3 cDNA合成
                2.2.3.4 实时荧光定量PCR检测
            2.2.4 细胞侵袭和迁移检测
                2.2.4.1 Transwell小室实验观察B16 细胞的侵袭及迁移
                2.2.4.2 划痕法检测细胞迁移
            2.2.5 FCM检测细胞周期
            2.2.6 WB法测定相关蛋白的表达
                2.2.6.1 蛋白样品制备
                2.2.6.2 BCA法对蛋白质进行定量
                2.2.6.3 SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白
            2.2.7 动物实验
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 VO-Ohpic抑制小鼠恶性黑色素瘤B16 细胞PTEN表达
        3.2 PTEN功能降低促进恶性黑色素瘤B16细胞的增殖
        3.3 抑制PTEN增强黑色素瘤B16细胞的迁徙和侵袭能力
        3.4 抑制PTEN可活化PI3K/AKT信号通路
        3.5 B16细胞PTEN受抑增强其在体内的生长与转移
        3.6 小鼠机体PTEN功能受抑增强恶性黑色素瘤的生长与转移
    4 讨论
    小结
结论
参考文献
缩略词表
攻读学位期间完成的科研成果
致谢



本文编号：3863992