基于CRISPR/Cas9系统的水稻光敏色素互作因子OsPIL15基因编辑

发布时间：2023-11-14 18:14

　　【目的】光作为一种环境信号,可影响植物的基因表达、酶活性和形态建成。光敏色素互作因子在光信号传导过程中起着重要作用。本研究旨在构建水稻光敏色素互作因子OsPIL15的CRISPR/Cas9表达载体,创制OsPIL15突变体,挖掘水稻功能基因,丰富和完善水稻光信号调控分子机制。【方法】依据CRISPR/Cas9技术原理,设计OsPIL15突变靶点。将所设计靶序列在水稻基因组中进行比对,排除非特异性靶位点,同时使该靶序列含有常用酶切位点,方便后期突变体鉴定。化学合成靶位点寡核苷酸序列并与载体pBUN411连接构建CRISPR/Cas9表达载体,利用农杆菌介导法导入粳稻品种日本晴,以除草剂抗性标记筛选获得阳性转基因植株。利用酶切法判断T0代转基因植株是否发生突变,结合测序结果分析突变单株的突变基因型。将靶点序列在水稻全基因组中进行比对分析,选择5个与靶序列同源性较高且错配在4 bp以内的位点作为潜在脱靶位点进行脱靶效应评估,分析所设计靶序列特异性。【结果】所构建表达载体成功实现了对OsPIL15的定向编辑,酶切显示在选取的25株T0代转基因植株中获得15株突变体,其中包括5株纯合突变体、6株...

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 靶位点设计和CRISPR/Cas9表达载体构建
    1.3 酶切和测序分析验证突变位点
    1.4 潜在脱靶位点分析
2 结果
    2.1 Os PIL15靶点设计和表达载体构建
    2.2 Os PIL15 T0代突变体筛选鉴定
    2.3 Os PIL15 T1代突变体分析鉴定
    2.4 ospil15突变体脱靶效应评估
    2.5 Os PIL15功能初步分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3863951