基于转录组测序鉴定调控鸡胚肝脏组织抗氧化酶活性的关键基因及功能验证

发布时间：2023-11-18 09:27

　　鸡胚在孵化阶段依靠外界输入氧气参与机体基础生命代谢以维持机体正常发育,而后期随着加剧的胚胎生长会导致活性氧的加速产生,其过量的积累会打破氧化应激平衡,对机体造成干扰和损伤。此时存在于鸡胚内部的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、过氧化物酶(POD)等抗氧化酶会与之结合进而发生分解反应,以保证发育过程中的氧化应激平衡。有研究表明,在鸡胚整个孵化过程中分散在不同部位的抗氧化酶其种类和活性是持续变化的,然而对于调控抗氧化酶活性的作用机制尚未清晰,因此挖掘调控抗氧化酶活性的关键基因是本研究的主要目的。本课题基于转录组测序技术,筛选出鸡胚肝脏组织中调控抗氧化功能的差异表达基因,并构建过氧化氢诱导的鸡胚肝细胞氧化应激模型,以期探索关键基因的调控机理,试验结果如下所示:1.抗氧化酶活性检测结果:孵化期处于Day 12到Day 18的鸡胚肝脏组织中的SOD酶活和GSH-Px酶活均呈现先降低后增高的趋势,且Day 12和Day 16鸡胚肝脏组织的SOD酶活与GSH-Px酶活显著差异(p<0.05),因此,将孵化至Day 12和Day 16的鸡胚肝脏组织做为下一步转录组测序对...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 鸡胚抗氧化功能研究
        1.1.1 鸡胚简介
        1.1.2 氧化应激简介
        1.1.3 鸡胚的抗氧化作用研究现状
        1.1.4 调控鸡胚的抗氧化作用相关基因的研究进展
    1.2 转录组测序技术的研究现状
        1.2.1 转录组测序技术
        1.2.2 测序技术的发展
        1.2.3 转录组测序技术在鉴定重要性状关键基因上的应用
    1.3 本课题研究目的及意义
第二章 鸡胚肝脏组织抗氧化酶活性测定
    2.1 引言
    2.2 试验材料与仪器
        2.2.1 试验材料
        2.2.2 试验仪器
    2.3 试验方法
        2.3.1 试验材料预处理
        2.3.2 蛋白含量检测
        2.3.3 超氧化物歧化酶(SOD)检测
        2.3.4 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测
    2.4 试验结果与分析
        2.4.1 蛋白含量检测
        2.4.2 超氧化物歧化酶活性检测
        2.4.3 谷胱甘肽过氧化物酶活性检测
    2.5 本章结论
第三章 基于转录组测序技术筛选调控鸡胚肝脏组织抗氧化功能差异表达基因
    3.1 引言
    3.2 试验材料与仪器
        3.2.1 试验材料
        3.2.2 试验仪器
    3.3 试验方法
        3.3.1 肝脏组织总RNA提取
        3.3.2 总RNA质量检测
        3.3.3 cDNA文库构建
        3.3.4 转录组测序
        3.3.5 荧光定量PCR检测
    3.4 试验数据分析
        3.4.1 总RNA质量检测
        3.4.2 测序原始数据质量评估
        3.4.3 试验相关性分析
        3.4.4 基因表达水平分析
        3.4.5 差异表达分析
        3.4.6 差异表达基因富集分析
    3.5 试验结果与分析
        3.5.1 总RNA提取质量检测
        3.5.2 转录组测序数据质量评估
        3.5.3 参考序列比对
        3.5.4 基因表达水平分析
        3.5.5 差异基因表达分析
        3.5.6 差异表达基因富集分析
        3.5.7 差异表达基因验证
        3.5.8 讨论
    3.6 本章结论
第四章 维生素C缓解过氧化氢诱导的鸡胚肝细胞氧化应激探究
    4.1 引言
    4.2 试验材料及仪器
        4.2.1 试验材料
        4.2.2 试验仪器
    4.3 试验方法
        4.3.1 培养板包被
        4.3.2 鸡胚肝细胞分离体外培养
        4.3.3 过氧化氢浓度区间设定检测
        4.3.4 试验分组设计
        4.3.5 肝细胞存活率的检测
        4.3.6 超氧化物歧化酶活检测
        4.3.7 维生素C对氧化应激的缓解作用
        4.3.8 荧光定量PCR检测
    4.4 试验结果与分析
        4.4.1 原代鸡胚肝细胞体外培养
        4.4.2 过氧化氢浓度区间的选择
        4.4.3 过氧化氢处理对鸡胚肝细胞存活率的影响
        4.4.4 过氧化氢对肝细胞超氧化物歧化酶活性的影响
        4.4.5 维生素C的安全浓度的筛选
        4.4.6 鸡胚肝细胞的活力变化检测
        4.4.7 关键基因的验证
    4.5 本章结论
第五章 结论与展望
    5.1 试验结论
    5.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况



本文编号：3865013