N端BRD4蛋白在液相分离和基因转录中的作用

发布时间：2023-11-18 12:28

　　表观遗传学是在基因DNA序列不发生改变的情况下,研究可遗传的基因表达的一门学科。所研究对象是染色质的DNA和组蛋白化学修饰,例如组蛋白乙酰化、DNA甲基化等。它们相互作用维持机体内环境的稳定,控制细胞表型;其修饰异常会导致肿瘤和自身免疫性疾病等各种疾患的发生。BRD4含有两个溴结构域和一个超末端结构,是表观遗传修饰的阅读蛋白质。在整个细胞周期中,其溴结构域识别乙酰化的组蛋白,在高乙酰化和转录活跃的染色质区域聚集(包括启动子和增强子)招募不同的转录因子,如介导蛋白Mediator和P-TEFb形成蛋白质复合物组装的成核中心,促进RNA Pol II的活性,刺激基因转录的起始和延伸,从而调控细胞的生长和分化。BRD4的表达异常与急性髓细胞性白血病、黑色素瘤、伯基特淋巴瘤、结肠癌、多发性骨髓瘤、NUT中线癌和乳腺癌等多种肿瘤的发生发展密切相关;通过小分子靶向抑制BRD4,能诱发肿瘤细胞凋亡及增殖减缓,从而达到抗肿瘤的作用,因此,BRD4作为抗癌药物研发的重要靶标被广泛认可。但其具体的作用机制我们仍然不清楚。在细胞中存在许多无膜的细胞器样结构,这些结构包含蛋白质,核酸等生物功能分子,能够在局部...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
中英文缩略词对照表
第1章 绪论
    1.1 表观遗传与肿瘤
    1.2 溴结构域
        1.2.1 溴结构域蛋白的结构和分类
        1.2.2 BET蛋白家族的结构及功能
    1.3 BRD4 蛋白的生理功能
        1.3.1 BRD4 与组蛋白
        1.3.2 BRD4 与非组蛋白
        1.3.3 BRD4 蛋白与肿瘤
    1.4 蛋白质的液液相分离
        1.4.1 生物学功能
        1.4.2 调节细胞相分离的途径
        1.4.3 液液相分离与疾病
    1.5 论文的研究目的和设计思路
        1.5.1 论文的研究目的
        1.5.2 论文的实验设计
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞系
        2.1.2 实验主要仪器
        2.1.3 主要使用试剂
        2.1.4 抗体
        2.1.5 与蛋白结合的双链DNA序列
        2.1.6 实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)所需的引物序列
        2.1.7 实验中使用的试剂盒
    2.2 溶液的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 蛋白纯化
        2.3.2 生物素标记的双链DNA的合成
        2.3.3 电泳迁移率变动分析(EMSA)
        2.3.4 荧光偏振(FA)检测
        2.3.5 细胞培养
        2.3.6 免疫荧光鉴定
        2.3.7 蛋白质磷酸化
        2.3.8 细胞转染
        2.3.9 实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验
        2.3.10 蛋白免疫印迹(Western Blot)实验
        2.3.11 统计学方法
第3章 实验结果
    3.1 BRD4 蛋白的N末端能结合DNA
        3.1.1 BRD4S与 DNA结合的结果
        3.1.2 BRD4 不同片段与DNA结合的结果
        3.1.3 BET抑制剂对BRD4与DNA结合的影响
    3.2 BRD4 溴结构域以及无序结构区域对DNA亲和力的影响
        3.2.1 BRD4 溴结构域对DNA亲和力的影响
        3.2.2 BRD4 无序结构区域对DNA亲和力的影响
        3.2.3 BRD4 蛋白磷酸对DNA亲和力的影响
    3.3 BRD4 蛋白与DNA的结合促进BRD4 蛋白的液态相分离以及染色质聚集
        3.3.1 BRD4S蛋白在体外形成液滴
        3.3.2 BRD4S蛋白在细胞内形成液滴
        3.3.3 BET抑制剂对BRD4 核斑点形成的影响
        3.3.4 BRD4 液相分离对基因转录的影响
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在读期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3865287