绣球花HmDFR基因的克

发布时间：2023-11-23 20:57

　　绣球花(Hydrangea macrophylla)为虎耳草科绣球属小灌木。不同品种的绣球花花色花型各异,极具观赏价值,广泛应用于庭院栽培、园林景观设计及鲜切花材料中。花色是观赏植物最重要的特征之一,阐明花色相关的调控途径对新品种的培育具有重要的理论意义。为了探究绣球花不同花色的形成机制,本课题组前期完成了 3个不同绣球花品种的不同颜色萼片的转录组测序。分析转录组测序结果发现,绣球花DFR(二氢黄酮醇-4-还原酶)基因家族的表达丰度与花色关系密切,其中编号为Cluster-33435.81339的转录本与花色的深浅程度呈现显著正相关。本研究克隆了该转录本的全长序列,证实其编码一个绣球花中的二氢黄酮醇-4-还原酶,将其命名为HmDFR。通过实时荧光定量PCR,分析了该基因在3个品种的绣球花的根、茎、叶、芽及不同发育时期的萼片中的表达模式,结合花色苷含量进行关联分析,探讨HmDFR基因在绣球花3个品种花色形成过程中发挥的功能。本研究的主要结果如下:1.‘绣球’、‘无尽夏’、‘伊米莉亚’萼片的花色苷含量测定。通过观察3个品种绣球花萼片的颜色变化,将其按照颜色深浅程度划分为6个不同的发育阶段,...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 绣球花简介
        1.1.1 绣球花形态特征
        1.1.2 绣球花资源分布
        1.1.3 绣球花观赏应用价值
    1.2 绣球花的国内外研究进展
    1.3 植物花色概述
        1.3.1 花瓣色素组成
        1.3.2 花色苷的生物合成途径
        1.3.3 花色苷生物合成途径相关基因在花色改良中的应用
    1.4 课题来源与依据
        1.4.1 课题来源
        1.4.2 课题依据
    1.5 研究内容及技术路线
        1.5.1 研究内容
        1.5.2 技术路线
2 绣球花萼片不同发育时期的花色苷含量分析
    2.1 材料
        2.1.1 供试材料
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验设备
    2.2 测定原理
    2.3 方法
    2.4 数据处理
    2.5 结果
        2.5.1 绣球花萼片的形态特征变化
        2.5.2 绣球花萼片不同发育时期花色苷含量
    2.6 讨论
3 绣球花HmDFR基因的克隆及生物信息学分析
    3.1 材料
        3.1.1 供试材料
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 主要试剂配制
        3.1.4 菌株及载体
        3.1.5 实验设备
    3.2 方法
        3.2.1 基因组DNA提取
        3.2.2 植物总RNA提取
        3.2.3 cDNA反转录
        3.2.4 克隆引物设计
        3.2.5 PCR体系构建
        3.2.6 PCR扩增产物回收
        3.2.7 A-T克隆
        3.2.8 阳性筛选及鉴定
        3.2.9 目标基因生物信息学分析
    3.3 结果
        3.3.1 绣球花叶片基因组DNA提取
        3.3.2 绣球花萼片总RNA提取
        3.3.3 绣球花HmDFR基因的克隆
        3.3.4 绣球花HmDFR基因的生物信息学分析
    3.4 讨论
4 HmDFR基因在绣球花中的表达分析
    4.1 材料
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器及设备
    4.2 方法
        4.2.1 提取各样品总RNA
        4.2.2 各样品总RNA检测
        4.2.3 实时荧光定量特异引物设计
        4.2.4 实时荧光定量体系及程序
    4.3 数据处理
    4.4 结果
        4.4.1 各样品总RNA提取
        4.4.2 定量引物特异性检测及分析
        4.4.3 HmDFR基因在‘绣球’根、茎、叶、芽及萼片不同发育时期的相对表达量
        4.4.4 HmDFR基因在‘无尽夏’根、茎、叶、芽及萼片不同发育时期的相对表达量
        4.4.5 HmDFR基因在‘伊米莉亚’根、茎、叶、芽及萼片不同发育时期的相对表达量
    4.5 花色与HmDFR基因表达的相关性分析
    4.6 讨论
5 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 研究展望
参考文献
附录 A (攻读学位期间的主要学术成果)
致谢



本文编号：3866199