杨树Ptann3基因克隆与表达特性分析

发布时间：2023-11-24 18:47

　　膜联蛋白(Annexin)是一类Ca2+及磷脂结合蛋白,在非生物逆境胁迫方面发挥重要作用,但木本模式植物杨树膜联蛋白基因的研究还未见报道。本研究通过RT-PCR与RACE相结合的方法从毛果杨(Populus trichocarpa)克隆获得膜联蛋白3 (Ptann3)基因c DNA序列,分析发现编码蛋白质Ptann3与其他植物膜联蛋白高度同源,具有过氧化物酶活性结构域、S3氧化还原反应结构域、GTP结合结构域及钙结合位点。构建原核表达载体p ET-28a-Ptann3,转入大肠杆菌BL21 (DE3)中表达分析,Ptann3蛋白分子量35.6 kD,分析表明Ptann3蛋白具有过氧化物酶与ATPase活性。qPCR分析结果显示,Ptann3基因在根、上部茎、下部茎、叶柄、幼叶和成叶中均有表达,在幼叶中表达量最高,在叶柄和根中表达量次之,成叶和茎中表达量最低。此外,研究发现低温、ABA、PEG6000、H2O2和NaCl胁迫处理可显著影响Ptann3基因的表达,推测杨树Ptann3基因在非生物逆境胁迫中发挥重要作用,研究结果对杨树抗逆遗传改良具有重要意义。

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【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 基因克隆
    1.2 Ptann3蛋白分析
        1.2.1 Ptann3理化性质
        1.2.2 Ptann3蛋白信号肽、磷酸化位点、细胞定位
        1.2.3 Ptann3结构预测
    1.3 氨基酸比对以及进化树构建
    1.4 蛋白表达与纯化
    1.5 蛋白酶活测定
    1.6 组织表达分析
    1.7 胁迫分析
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 材料
    3.2 材料预处理
    3.3 RNA提取及cDNA的合成
    3.4 基因克隆与5'和3'非编码区扩增
    3.5 DNA片段测序、序列分析及Ptann3基因生物信息学分析
    3.6 荧光定量PCR组织表达与胁迫下Ptann3基因表达分析
    3.7 Ptann3蛋白表达、纯化及酶活性检测
作者贡献



本文编号：3866383