高原地区结核杆菌大片段基因多态性及其与耐药性的关系

发布时间：2024-01-23 20:11

　　目的获取青海高原地区结核病患者对结核治疗药物的耐药性,了解患者基本情况与耐药性的关系;对本地区结核菌株进行大片段多态性序列(large sequence polymorphisms,LSP;或称差异片段Regions of difference,RD)基因分型,并分析菌株耐药性与基因型是否相关;研究菌株磷脂酶C编码基因(phospholipase C,plc)的多态性及其与耐药水平的关系;同时探索RD和plc这两种大片段基因多态性之间是否存在联系。方法(1)收集青海地区可疑结核病患者痰样,经培养和鉴定后,刮取部分结核杆菌菌落,采用比例法药敏试验,检测菌株对常用结核治疗药物的耐药性。(2)煮沸法提集菌株样本DNA后,聚合酶链式反应(PCR)扩增结核菌基因组RD基因,对菌株进行RD基因分型。随机挑选部分菌株,对利福平、异烟肼热点耐药突变基因(rpoB、katG)进行测序,随后分析菌株比例法耐药结果及热点耐药基因(rpoB、katG)突变与RD基因型之间是否有关。(3)通过PCR检测结核杆菌的磷脂酶C编码基因,获得该基因的多态性特点。探索plc基因与菌株RD基因型、plc基因突变率与结核杆菌...

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
主要符号对照表
第1章 引言
第2章 菌株的培养鉴定及药敏结果分析
    2.1 研究对象
    2.2 所需器材和主要试剂
    2.3 菌株罗氏培养及鉴定
        2.3.1 改良罗氏培养基的制备方法
        2.3.2 标本前处理
        2.3.3 标本接种
        2.3.4 结核分枝杆菌的鉴定
    2.4 质量控制
    2.5 药敏培养基的制备及药敏试验
        2.5.1 药敏培养基的制备
        2.5.2 比例法药敏试验的接种和培养步骤
    2.6 菌株来源及比例法药敏结果
        2.6.1 菌株来源
        2.6.2 一线药物的药敏结果
        2.6.3 二线药物药敏结果
    2.7 讨论
第3章 结核杆菌RD基因分型
    3.1 研究对象
    3.2 主要仪器和试剂
    3.3 菌株DNA的提取
    3.4 RD基因分型实验操作过程
        3.4.1预实验
        3.4.2样本正式实验
        3.4.3 琼脂糖凝胶电泳及成像
    3.5 质量控制
    3.6 结核分枝杆菌RD基因分型结果
        3.6.1 本地区RD分型结果及与其他地区结果比较
        3.6.2 菌株RD分型与人口学特征联系
        3.6.3 RD分型与菌株耐药表型的联系
        3.6.4 RD分型与热点耐药基因突变的关系
    3.7 讨论
第4章 结核杆菌的磷脂酶C基因多态性
    4.1 研究对象
    4.2 主要仪器和试剂
    4.3 检测plc基因实验操作过程
        4.3.1预实验
        4.3.2样本正式实验
        4.3.3 琼脂糖凝胶电泳及成像
    4.4 结核分枝杆菌plc基因多态性结果
        4.4.1 plc基因扩增结果
        4.4.2 plc基因型与菌株表型耐药的结果分析
        4.4.3 菌株基因型与plc基因突变的关系
    4.5 讨论
第5章 结论
参考文献
综述 结核分枝杆菌的主要基因分型方法概述
    参考文献
致谢
作者在读期间科研成果简介



本文编号：3883294