口腔鳞癌细胞外泌体的分离鉴定及基因表达谱分析

发布时间：2024-02-07 02:27

　　背景:口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部发生率最高的恶性肿瘤,易发生复发和转移,预后较差。寻找特异性的生物标志分子,进行无创性的早期筛查或诊断工具的开发,对改善口腔鳞癌患者预后差、存活率低、复发率高的现状至关重要。近年来,关于外泌体的研究内容不断增加,研究思路不断拓宽,其在人体多种疾病尤其是肿瘤发生、生长、转移等方面的功能不断被挖掘出来,外泌体已成为目前癌症研究中的新方向及新热点。目的:本研究旨在对口腔鳞癌细胞(Cal27)及口腔上皮细胞(Human oral epithelial cells,HOEC)来源的外泌体进行分离鉴定及基因表达谱分析,为寻找与口腔鳞癌相关的特异性外泌体提供研究基础。方法:采用超速离心法从细胞培养上清中分离外泌体,透射电镜观察其形貌特征,粒度仪分析其粒子直径大小及分布情况,蛋白质印记及流式细胞术检测其标志蛋白(ALIX、CD63、CD81)。利用高通量测序技术全面掌握两种外泌体基因表达谱,筛选差异表达基因,并对差异基因进行KEGG生物通路富集分析及GO基因功能富集分析。结果:1)Cal27及HOEC外泌体均呈圆形或椭圆形,直径均分布在30-150nm区间,ALIX、C...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1透射电镜观察外泌体形态（25000）

图2-1透射电镜观察外泌体形态（25000）2.3.2外泌体标志蛋白检测蛋白质印记结果显示，Cal27及HOEC来源的外泌体均表达ALIX蛋白（图2-2）。利用流式细胞术在两种外泌体中均检测到CD63、CD81两种蛋白的表达（图2-3）。图2-2蛋白质....

图2-2蛋白质印记检测ALIX标志蛋白

Cal27及HOEC来源的外泌体均表达ALIX蛋白（图2-2）。利用流式细胞术在两种外泌体中均检测到CD63、CD81两种蛋白的表达（图2-3）。图2-2蛋白质印记检测ALIX标志蛋白注：以Cal27及HOEC两种细胞内的ALIX蛋白作为阳性对....

图2-3流式细胞术检测CD63及CD81蛋白

图2-3流式细胞术检测CD63及CD81蛋白2.3.3外泌体粒径检测粒径仪测定结果显示:两种外泌体粒径大小较为集中,大多集中在30-150nm之间。颗粒直径区间累积百分比显示：在0-30nm，30-150nm和＞150nm三个区间内，Cal27分别为0、....

图2-4外泌体粒径分布测定

图2-4外泌体粒径分布测定注：a.Cal27外泌体粒径及分布图，b.HOEC外泌体粒径及分布图。2.4讨论外泌体是由细胞分泌的大小约30-150nm的纳米级胞外囊泡。由于体积微小，外泌体能自由地穿过血管壁及细胞基质并有效避免体内单核巨噬细胞的吞噬，因此，其可以广泛....

本文编号：3896604