基于CRISPR/Cas9技术的水稻pi21基因编辑材料的创制及稻瘟病抗性鉴定

发布时间：2024-02-07 05:30

　　利用CRISPR-Cas9技术,对水稻稻瘟病感病品种日本晴pi21基因进行定点突变,获得了抗稻瘟病的pi21隐性突变株系。基因编辑载体T0转化植株的检测结果表明,86.7%的T0植株的pi21基因靶序列发生了碱基缺失。通过T-DNA序列的PCR检测,剔除携带T-DNA的T1植株,从23个T1株系筛选获得107个不含T-DNA转基因序列的植株。然后对pi21的编辑位点进行酶切和测序分析,获得了21株pi21纯合突变体。对1个pi21突变株系进行稻瘟病菌孢子喷雾接种,与未转化日本晴相比,突变株系显著抗病。对接种水稻样品的6个病程相关基因进行q RT-PCR分析,与感病日本晴比较,pi21突变株系在接种稻瘟病菌后,病程相关基因诱导表达的速度更快,表达量更高。本研究利用基因编辑技术,实现了对感稻瘟病水稻的定点突变并提高了其稻瘟病抗性水平,为利用该技术培育持久抗稻瘟病水稻品种奠定了研究基础。

【文章页数】：15 页

【文章目录】：
1结果与分析
    1.1日本晴pi21基因的靶位点设计
    1.2水稻T0转化植株的突变检测
    1.3 T1植株T-DNA的剔除和pi21纯合突变的筛选
    1.4 pi21基因编辑株系的抗稻瘟病接种鉴定
    1.5 pi21基因编辑株系PR基因的表达分析
2讨论
3材料与方法
    3.1 植物材料、载体和菌株
    3.2 p BDL39表达载体构建
    3.3 阳性转基因植株的获得及验证
    3.4 靶序列酶切和测序分析
    3.5 水稻发芽和育苗
    3.6 稻瘟病菌活化培养和孢子收集
    3.7 稻瘟菌孢子喷雾接种
    3.8 接种后取样和q RT-PCR分析
作者贡献



本文编号：3896846