致癌基因UBE2C在肝细胞癌中的表达和功能研究

发布时间：2024-02-14 02:12

　　背景肝细胞癌(HCC)是全球癌症相关死亡的第三大原因。而且肝癌的病程早期症状不明显,但晚期进展却十分迅速,这些特点导致肝癌的诊治较为困难。尽管近年来肝癌的诊断与治疗有着突飞猛进的发展,但是患者的总体预后仍不容乐观。目前,有多篇文献报道提示泛素结合酶E2C(UBE2C)在多种人类癌症中过表达并且可能扮演致癌基因的作用。然而,关于UUBE2C在肝细胞癌发生发展中的生物学功能、临床病理意义等信息知之甚少。方法在本研究中,我们首先使用生物信息学的方法分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中的数据资料,对肝癌患者体内UBE2C mRNA表达水平与癌症分级及预后的关系进行分析。接着我们利用RT-PCR及免疫组织化学染色的方法分别在临床肝细胞癌病人组织标本中验证了数据库中得出的结果,并分析了UUBE2C的表达情况与肝癌临床病理学及预后的联系。此后,通过在肝癌细胞系SK-Hep-1和SMMC-7721中构建敲低稳转细胞系,采用了CCK-8、克隆形成及transwell等方法探讨了UBE2C在肝癌中的生物学功能。此外,我们利用两种常用的化疗药物阿霉素(ADR)和5-氟尿嘧啶(5-FU)及分子靶向药物索拉菲...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 前言
    1.1 原发性肝癌
        1.1.1 原发性肝癌概述
        1.1.2 流行病学
        1.1.3 病因及机制
        1.1.4 目前常用诊断方法
        1.1.5 目前常用治疗方法
    1.2 蛋白酶体
    1.3 泛素
    1.4 APC/C
    1.5 泛素结合酶家族与癌症
    1.6 泛素结合酶E2C(UBE2C)
    1.7 TCGA数据库
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要药品和试剂
        2.1.2 主要实验所用耗材
        2.1.3 主要试剂配制方法
        2.1.4 主要设备
        2.1.5 细胞株,工程菌株
        2.1.6 临床组织标本
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 UBE2C敲低细胞系的构建
        2.2.3 CCK-8实验
        2.2.4 克隆形成实验
        2.2.5 Transwell实验
        2.2.6 蛋白质免疫印迹
        2.2.7 免疫组织化学
        2.2.8 组织RNA提取
        2.2.9 组织cDNA合成
        2.2.10 实时荧光定量核酸扩增检测系统
        2.2.11 统计方法
第三章 实验结果与分析
    3.1 基于TCGA数据库分析挖掘UBE2C在肝癌中的表达及预后意义
    3.2 UBE2C在肝癌组织标本中高表达且与不良预后相关
    3.3 敲低UBE2C抑制肝癌细胞增殖能力
    3.4 敲低UBE2C抑制肝癌细胞侵袭迁移
    3.5 UBE2C降低肝癌细胞化疗敏感性
    3.6 UBE2C降低肝癌细胞对靶向药物索拉菲尼的敏感性
第四章 讨论与展望
参考文献
致谢
附件



本文编号：3897577