不同季节牦牛机体棕色脂肪组织相关基因表达差异及其脂肪酸组成成分的比较
发布时间：2024-02-18 03:10
棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)利用脂肪酸作为代谢底物,通过β氧化和解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)的去耦作用在线粒体中产生热量,燃烧脂肪。目前,关于BAT研究主要集中于人和小型哺乳动物,而在较大的动物身上鲜有报道。长期在高原环境下生活的牦牛拥有耐寒的独特体质,使牦牛成为探究动物机体对寒冷环境适应性机制最佳的研究对象。因此,本试验针对不同季节牦牛机体棕色脂肪组织相关基因差异表达和其脂肪酸成分是否有关联,随机选取冷季(一月)和暖季(十月)的放牧成年牦牛脊椎、肩胛、皮下、肾脏周围、腹部五个脂肪组织作为试验材料,开展免疫组化、Western blotting、Real-time PCR、RNA-Seq技术以及测定脂肪酸成分一系列的研究,从分子角度揭示牦牛机体棕色脂肪,并为牦牛在寒冷环境下生存的机理提供基础数据。研究结果如下:(1)UCP1蛋白表达和基因相对表达量:利用免疫组化和Western blotting检测得到UCP1蛋白在不同季节牦牛五个脂肪组织中均有表达,且在皮下脂肪、肩胛、肾脏脂肪组织中表达较高,差异显著(P<...
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 综述
1.1 牦牛简介
1.1.1 不同季节放牧牦牛生长特点
1.1.2 低温环境下牦牛机体生存机制
1.1.3 牦牛机体脂肪酸研究进展
1.2 棕色脂肪组织
1.2.1 寒冷刺激下BAT的产热机制
1.2.2 棕色脂肪组织的分布
1.2.3 UCP1 基因研究进展
1.3 转录组学
1.3.1 RNA-Seq技术
1.3.2 RNA-Seq技术原理
1.3.3 RNA-Seq应用
1.4 研究意义
第二章 不同季节牦牛棕色脂肪组织UCP1 蛋白表达分析
2.1 前言
2.2 试验材料、仪器
2.2.1 试验材料
2.2.2 试验试剂
2.2.3 试验仪器
2.3 试验方法
2.3.1 HE染色
2.3.2 免疫组化
2.3.3 Western blotting
2.4 结果和分析
2.4.1 HE染色结果
2.4.2 免疫组化结果
2.4.3 牦牛棕色脂肪组织相关蛋白表达
2.5 讨论
2.6 本章小结
第三章 不同季节牦牛棕色脂肪组织中UCP1 基因相对表达量分析
3.1 前言
3.2 试验材料、仪器
3.2.1 试验材料采集
3.2.2 试验试剂
3.2.3 试验仪器
3.3 试验方法
3.3.1 牦牛脂肪组织Total RNA提取
3.3.2 Total RNA的浓度和纯度检测
3.3.3 Real-time PCR
3.3.4 数据处理
3.4 结果分析
3.4.1 RNA电泳及完整性检测
3.4.2 PCR扩增电泳图
3.4.3 不同季节牦牛脂肪组织UCP1 基因荧光定量
3.5 讨论
3.6 本章小结
第四章 牦牛脊椎脂肪组织RNA-Seq分析
4.1 前言
4.2 试验材料、仪器
4.2.1 试验材料
4.2.2 试验试剂
4.2.3 试验仪器
4.3 试验方法
4.3.1 牦牛脂肪组织Total RNA提取
4.3.2 Total RNA的 RIN值测定
4.3.3 文库构建与质检、上机测序
4.3.4 信息分析流程
4.3.5 Real-time PCR试验验证转录组学
4.4 RNA-Seq数据质检结果
4.4.1 RNA电泳及完整性检测
4.4.2 数据质控
4.4.2.1 测序数据的过滤错误率的分布
4.4.2.2 错误率的分布
4.4.3 数据质量汇总
4.4.4 比对率统计
4.4.5 比对区域分布
4.4.6 基因定量分析
4.4.7 样品间相关性
4.5 差异基因表达结果
4.5.1 不同季节牦牛脊椎脂肪组织差异基因表达分析
4.5.2 育肥牦牛脊椎脂肪组织差异基因表达分析
4.5.3 差异基因聚类分析
4.5.4 Real-time PCR验证差异基因表达
4.5.4.1 Real-time PCR验证不同季节样品差异基因表达
4.5.4.2 Real-time PCR验证育肥样品差异基因表达
4.6 富集结果
4.6.1 不同季节牦牛脊椎脂肪组织基因富集分析
4.6.2 育肥牦牛脊椎脂肪组织基因富集分析
4.7 讨论
4.8 本章小结
第五章 不同季节牦牛脂肪组织脂肪酸成分的比较
5.1 前言
5.2 试验材料、仪器
5.2.1 试验材料采集
5.2.2 试验试剂
5.2.3 试验仪器
5.3 试验方法
5.3.1 牦牛脂肪组织甲脂化
5.3.2 气相色谱质谱
5.3.3 数据分析
5.4 结果分析
5.4.1 不同季节牦牛脂肪组织脂肪酸含量测定
5.4.2 不同季节牦牛脂肪组织脂肪酸含量和UCP1 基因相对表达量关系
5.5 讨论
5.6 本章小结
结论
1 不同季节牦牛棕色脂肪组织中UCP1 蛋白表达
2 不同季节牦牛棕色脂肪组织中UCP1 基因相对表达量
3 RNA-Seq分析牦牛脊椎脂肪组织
4 不同季节牦牛脂肪组织脂肪酸含量的比较
展望
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3901793
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 综述
1.1 牦牛简介
1.1.1 不同季节放牧牦牛生长特点
1.1.2 低温环境下牦牛机体生存机制
1.1.3 牦牛机体脂肪酸研究进展
1.2 棕色脂肪组织
1.2.1 寒冷刺激下BAT的产热机制
1.2.2 棕色脂肪组织的分布
1.2.3 UCP1 基因研究进展
1.3 转录组学
1.3.1 RNA-Seq技术
1.3.2 RNA-Seq技术原理
1.3.3 RNA-Seq应用
1.4 研究意义
第二章 不同季节牦牛棕色脂肪组织UCP1 蛋白表达分析
2.1 前言
2.2 试验材料、仪器
2.2.1 试验材料
2.2.2 试验试剂
2.2.3 试验仪器
2.3 试验方法
2.3.1 HE染色
2.3.2 免疫组化
2.3.3 Western blotting
2.4 结果和分析
2.4.1 HE染色结果
2.4.2 免疫组化结果
2.4.3 牦牛棕色脂肪组织相关蛋白表达
2.5 讨论
2.6 本章小结
第三章 不同季节牦牛棕色脂肪组织中UCP1 基因相对表达量分析
3.1 前言
3.2 试验材料、仪器
3.2.1 试验材料采集
3.2.2 试验试剂
3.2.3 试验仪器
3.3 试验方法
3.3.1 牦牛脂肪组织Total RNA提取
3.3.2 Total RNA的浓度和纯度检测
3.3.3 Real-time PCR
3.3.4 数据处理
3.4 结果分析
3.4.1 RNA电泳及完整性检测
3.4.2 PCR扩增电泳图
3.4.3 不同季节牦牛脂肪组织UCP1 基因荧光定量
3.5 讨论
3.6 本章小结
第四章 牦牛脊椎脂肪组织RNA-Seq分析
4.1 前言
4.2 试验材料、仪器
4.2.1 试验材料
4.2.2 试验试剂
4.2.3 试验仪器
4.3 试验方法
4.3.1 牦牛脂肪组织Total RNA提取
4.3.2 Total RNA的 RIN值测定
4.3.3 文库构建与质检、上机测序
4.3.4 信息分析流程
4.3.5 Real-time PCR试验验证转录组学
4.4 RNA-Seq数据质检结果
4.4.1 RNA电泳及完整性检测
4.4.2 数据质控
4.4.2.1 测序数据的过滤错误率的分布
4.4.2.2 错误率的分布
4.4.3 数据质量汇总
4.4.4 比对率统计
4.4.5 比对区域分布
4.4.6 基因定量分析
4.4.7 样品间相关性
4.5 差异基因表达结果
4.5.1 不同季节牦牛脊椎脂肪组织差异基因表达分析
4.5.2 育肥牦牛脊椎脂肪组织差异基因表达分析
4.5.3 差异基因聚类分析
4.5.4 Real-time PCR验证差异基因表达
4.5.4.1 Real-time PCR验证不同季节样品差异基因表达
4.5.4.2 Real-time PCR验证育肥样品差异基因表达
4.6 富集结果
4.6.1 不同季节牦牛脊椎脂肪组织基因富集分析
4.6.2 育肥牦牛脊椎脂肪组织基因富集分析
4.7 讨论
4.8 本章小结
第五章 不同季节牦牛脂肪组织脂肪酸成分的比较
5.1 前言
5.2 试验材料、仪器
5.2.1 试验材料采集
5.2.2 试验试剂
5.2.3 试验仪器
5.3 试验方法
5.3.1 牦牛脂肪组织甲脂化
5.3.2 气相色谱质谱
5.3.3 数据分析
5.4 结果分析
5.4.1 不同季节牦牛脂肪组织脂肪酸含量测定
5.4.2 不同季节牦牛脂肪组织脂肪酸含量和UCP1 基因相对表达量关系
5.5 讨论
5.6 本章小结
结论
1 不同季节牦牛棕色脂肪组织中UCP1 蛋白表达
2 不同季节牦牛棕色脂肪组织中UCP1 基因相对表达量
3 RNA-Seq分析牦牛脊椎脂肪组织
4 不同季节牦牛脂肪组织脂肪酸含量的比较
展望
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3901793
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