cry1A基因通用检测方法的建立

发布时间：2024-02-24 22:25

　　cry1A基因编码苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白,是转基因植物使用最为广泛的抗虫基因,包括cry1Ab、cry1Ac、cry1A.105、cry1Ab/Ac等类型,cry1A基因为靶标的检测方法在转基因植物安全监管与检测中尤为重要。虽已建立数种cry1A基因检测方法,但均因该基因间序列差别较大而无法覆盖大部分转化体。由此,采用简并引物的策略,开发了一种cry1A基因通用检测方法,检测能力覆盖了常见的16种含cry1A的转化体,开发过程包括实验室内部方法建立和实验室间循环验证。结果表明,该方法在引物终浓度0.4μmol·L^-1,退火温度64℃的条件下,能够特异性检测样品中含有的cry1A基因,检出限为0.1%。开发的cry1A基因检测方法参数全面,重复性和重现性良好,为国内外转基因成分监管与检测提供方法参考。

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【部分图文】：

图1PCR反应体系和反应程序优化结果

特异性验证结果(图2)显示,仅从含有cry1A基因的材料中获得预期扩增产物,而从其他样品中未获得预期扩增产物,表明方法特异性符合要求。此外,上述不含cry1A基因的材料中包含了部分Bt基因的其他类别,实验时均未获得扩增,表明方法对cry1A基因特异性良好,可以用于cry1A基因的....

图2引物特异性验证

图1PCR反应体系和反应程序优化结果2.4方法检出限分析

图3转基因玉米Bt176对方法检出限测试

欧盟标准物质Bt11(0.098%)、MON810(<0.09%)Bt176(0.1%)均能稳定检出,对可检出的最低质量分数的测试样品,60次重复实验均有扩增条带,确定方法的检出限为0.1%(部分结果见图3)。2.5实验室间重复性分析

本文编号：3909649