大豆液泡加工酶VPE基因表达方式分析及其启动子预测

发布时间：2024-02-28 00:58

　　利用qRT-PCR方法,检测大豆液泡加工酶VPE基因在盐、干旱、低温、ABA条件下及大豆不同组织中的表达情况,结果显示VPE基因在盐、干旱、低温和ABA处理不同时间下,VPE基因的表达趋势基本相同,都是先随处理时间增加表达量升高,只是在盐处理中,最高表达量出现在5 h时,其它处理最高表达量出现在2 h,之后基因表达都下降。四种处理条件下,基因的表达变化不大,说明VPE基因基本不受盐、干旱、低温和ABA诱导。VPE基因在种子中的表达相对较高,尤其在90 DAF的种子中,相对于根的表达量为212.22倍。以大豆基因组DNA为模板,克隆VPE基因5’端上游启动子序列1 914 bp,生物信息学预测表明VPE基因启动子中存在多种与种子特异表达相关的顺式调控元件,推测该启动子可能具有调控下游基因在种子中高表达的特性。

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【部分图文】：

图4pMD18-T-VP的双酶切鉴定

图3VP的PCR扩增产物同样，本研究也进一步检测VPE基因在大豆各组织中的表达方式(图2)，不仅是在根、茎、叶、花中，也检测了不同发育时期的种子，发现VPE基因具有较好的组织特异性，即在大豆种子中的表达量最高，在根、茎、叶、花中表达都较低；此外，不同发育时期的种子中，以该基因的....

图5VP启动子序列

将盐胁迫、干旱胁迫、低温胁迫和ABA处理的各类大豆幼苗，在不同处理时间点，均称取3g叶片，分为3份，每份1g作为1次生物学重复。液氮研磨后，采用RNA提取试剂(TRIzolreagent)提取大豆总RNA，反转录获得cDNA，用于进行qRT-PCR反应。选用大豆持家基因β-....

图1大豆VPE基因在盐(A),干旱(B),低温(C)和脱落酸(D)条件下的表达

根据大豆基因组中VPE基因序列，设计引物，PCR扩增VPE基因上游的启动子序列，扩增片段长度为1914bp，命名为VP(图3)。将VP片段连接到pMD18-T载体上，转化大肠杆菌DH5α感受态，获得重组质粒pMD18-T-VP。采用PstⅠ与KpnⅠ限制性内切酶双酶切鉴定后....

图2大豆VPE基因在大豆各组织中的表达

图1大豆VPE基因在盐(A),干旱(B),低温(C)和脱落酸(D)条件下的表达1.4大豆VP启动子的生物信息学分析

本文编号：3913227