S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的原核可溶性表达及其转化应用

发布时间：2024-03-02 19:56

　　为提高来源于拟南芥的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(SAM1)在大肠埃希菌中的可溶性表达水平,采用无缝克隆的方法分别将谷胱甘肽巯基转移酶、TrxA蛋白、小分子泛素样修饰物(SUMO)蛋白、MsyB蛋白、泛素类蛋白这5种不同的融合标签与SAM1进行了N端融合表达。结果表明,SUMO蛋白作为融合标签时,SAM1表达菌株的可溶性蛋白表达量显著高于无融合标签的SAM1表达菌株,其细胞内可溶性蛋白总量达到401.19 mg/L。此外,对融合了SUMO蛋白标签的SAM1菌株和原始菌株进行菌体转化研究。结果表明,在菌体量相同的条件下,SUMO蛋白作为融合标签的SAM1表达菌株对底物的转化率为69.80%,相比原始菌株提高了40.51%。因此,选择SUMO蛋白作为融合标签能显著提高SAM1在大肠埃希菌中的可溶表达水平,为下一步对S-腺苷甲硫氨酸合成酶进行工业化应用提供参考。

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【部分图文】：

图2SAM1表达载体构建电泳图

电泳结果如图2所示,SAM1的各个原核重组表达载体构建已经完成,目的片段电泳检测条带大小与预期一致。2.4SAM1各表达菌株的可溶性蛋白含量检测及酶活性分析

图1SAM的酶合成法

ProminenceLC-20A型高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)；DYY-6C型电泳仪(北京市六一仪器厂)；96-WellThermalCyclerPCR仪(美国ThermoFisher公司)；SM-150A型超声破碎仪(南京舜玛仪器设备有限公司)。蛋白纯化....

图3SAM1活性HPLC色谱图

采用“2.4”项下发酵方法,收集各个表达菌株的菌体,用适量无菌水重悬后超声处理(菌体量一致),超声破碎后分别取破碎上清液、菌渣沉淀进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析。结果如图4所示,没有添加融合标签(带有His标签)的SAMS相对分子质量约为50000,与预期大小一....

图4SAM1及其不同融合蛋白的SDS-PAGE分析

表1各个表达菌株的可溶性蛋白及SAM1酶活检测(x__±s,n=3)Tab.1SolubleProteinandSAM1EnzymeActivityAssayofEachExpressionStrain(x__±s,n=3)菌株名称可溶性蛋白含量/....

本文编号：3917320