运用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼前肾表达基因的敲除研究

发布时间：2024-03-09 18:11

　　CRISPR/Cas9是目前最热门的基因编辑技术,是进行基因敲除的有效手段.斑马鱼是一种常用的研究脊椎动物器官发育的模式生物,本实验选取10个斑马鱼前肾表达基因atp1a1a1,atp1a1a.2,atp1a1a.3,atp1a1a.4,atp1a1a.5,pkd2,aqp3a,bmper,isl2a和tbx2a,运用CRISPR/Cas9技术进行基因敲除以研究肾脏发育.经过三代筛选,每个基因获得了至少一种移码突变.突变体的初步表型分析显示,10个基因中只有atp1a1a.2和pkd2基因突变可以导致斑马鱼胚胎发育缺陷,隐性致死,这与已经报道的突变体或基因敲降结果类似.上述结果表明CRISPR/Cas9基因编辑技术可在斑马鱼中高效地进行基因敲除,获得的突变体为以后深入研究斑马鱼前肾发育提供了重要材料.

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 质粒
        1.1.3 引物
        1.1.4 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 胚胎的收集
        1.2.2 基因gRNA靶位点的选择
        1.2.3 gRNA的合成
        1.2.4 CRISPR/Cas9活性检测
        1.2.5 基于CRISPR/Cas9技术的斑马鱼突变体构建
2 结果与分析
    2.1 CRISPR/Cas9gRNA活性检测
    2.2 子代携带突变的F0筛选
    2.3 F1杂合子的筛选
    2.4 斑马鱼前肾表达基因突变纯合子的表型鉴定
3 讨论



本文编号：3923740