小菜蛾气味结合蛋白OBP2基因的克

发布时间：2024-03-16 12:49

　　【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫寄主定位、产卵地选择等行为中发挥重要作用,克隆与鉴定小菜蛾Plutella xylostella OBP基因、明确其与配体化合物的结合特性有助于阐明小菜蛾嗅觉识别的分子机制。【方法】利用PCR技术克隆小菜蛾OBP2,对获得的编码序列全长进行信号肽及跨膜区域预测,用DNAMAN与其他昆虫的OBP2进行多序列比对,采用MEGA5.0邻接法(neighbor-joining method,NJ)构建进化树。通过实时定量PCR(qRT-PCR)分析Pxyl OBP2在小菜蛾不同发育阶段和不同组织中的表达模式。构建原核表达载体p ET28aPxyl OBP2,进行原核表达及蛋白纯化。利用荧光竞争结合实验对Pxyl OBP2蛋白与39种配基化合物的结合特性进行分析。【结果】成功获得小菜蛾OBP2基因Pxyl OBP2(Gen Bank登录号:KT070562)的编码序列全长,其完整开放阅读框大小为546 bp,编码182个氨基酸,具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸结合位点。荧光定量PCR结果表明,发育表达模...

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1. 1 供试虫源
    1. 2 主要试剂
    1. 3 引物的设计及合成
    1. 4 总RNA的提取及c DNA第一链的合成
    1. 5 小菜蛾气味结合蛋白OBP2 全长c DNA序列克隆及重组质粒构建
    1. 6 序列分析和进化树构建
    1. 7 小菜蛾气味结合蛋白基因OBP2 表达谱分析
    1. 8 重组蛋白表达条件的优化和纯化
    1. 9兔抗小菜蛾OBP2 多克隆抗体特异性的Western blot检测
    1. 10 小菜蛾Pxyl OBP2 重组蛋白的配基结合实验
    1. 11 数据处理
2 结果
    2. 1 小菜蛾气味结合蛋白基因c DNA的克隆及序列分析
    2.2 Pxyl OBP2氨基酸序列的比对及系统进化分析
    2. 3 小菜蛾Pxyl OBP2 的表达谱分析
    2. 4 p ET-OBP2 重组蛋白的表达及纯化
    2. 5 Pxyl OBP2 与不同气味分子结合能力分析
3 讨论与结论



本文编号：3929659