结球甘蓝AUX/IAA家族基因BoIAA2与BoIAA19的克隆与表达分析

发布时间：2024-03-31 02:24

　　为了探究AUX/IAA家族基因在结球甘蓝叶片与茎尖发育过程中的功能,筛选出对甘蓝叶片与茎尖发育具重要影响的相关AUX/IAA基因。试验以结球甘蓝品系"519"为材料,通过对莲座期叶片与茎尖,结球期叶片与茎尖的转录组比较分析,筛选出在两个组织中均表达差异显著的2个AUX/IAA基因,分别为BoIAA2与BoIAA19。采用PCR技术分别获得基因BoIAA2与BoIAA19的编码序列,其CDS(coding sequence)全长分别为519 bp、585 bp,编码172、194个氨基酸;进一步序列分析发现BoIAA2、BoIAA19分别与大白菜BrIAA2、油菜BnIAA19氨基酸同源相似性均达99%,且均具有AUX/IAA蛋白的DomainⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ特异性结构域。利用荧光定量PCR分析表明BoIAA2和BoIAA19在叶片、茎尖中的表达量均呈现出结球期高于莲座期的变化趋势,与转录组分析结果相符;对其结合蛋白基因BoTIR1和BoARF8进行表达分析,结果显示二者与BoIAA2、BoIAA19在叶片、茎尖中不同时期的表达量变化趋势一致;由此,推测BoIAA2和BoIAA19可能通过...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 叶片卷曲指数的测定
    1.3 甘蓝总RNA的提取
    1.4 转录组差异基因的筛选及基因克隆验证
    1.5 生物信息学分析
    1.6 AUX/IAA家族基因Bo IAA2与Bo IAA19的表达分析
    1.7 外源IAA诱导后基因Bo IAA2与Bo IAA19的表达分析
    1.8 AUX/IAA结合蛋白基因Bo ARF8和Bo TIR1的表达分析
2 结果与分析
    2.1 转录组筛选AUX/IAA家族基因
    2.2 Bo IAA2与Bo IAA19的基因克隆与分析
    2.3 Bo IAA2与Bo IAA19基因的生物信息学分析
        2.3.1 甘蓝Bo IAA2基因的序列分析
        2.3.2 甘蓝Bo IAA19基因的序列分析
        2.3.3 甘蓝AUX/IAA蛋白的亚细胞定位
        2.3.4 甘蓝AUX/IAA蛋白核定位信号NLS预测
        2.3.5 甘蓝AUX/IAA蛋白序列比对及保守域分析
    2.4 甘蓝Bo IAA2、Bo IAA19及其同源氨基酸序列的进化树分析
    2.5 基因Bo IAA2与Bo IAA19在甘蓝不同时期的表达分析
    2.6 外源IAA诱导后基因Bo IAA2与Bo IAA19的表达分析
    2.7 AUX/IAA结合蛋白基因Bo ARF8和Bo TIR1的表达分析
3 讨论



本文编号：3943301