敲除NIPBL基因可下调小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力

发布时间：2024-04-02 01:41

　　背景:德朗热综合征(Cornelia de Lange Syndrome,CdLS)是全身多种器官不同程度受累及的罕见遗传性疾病,其主要临床特征包括:智力障碍、特征性面容、上肢及脊柱畸形、多毛症等多种症状。目前已发现有7个基因(NIPBL、SMC1A、RAD21、BRD4、HDAC8、SMC3、ANKRD11)的突变参与CdLS的发生,约占70%CdLS患者检测出NIPBL基因发生突变。目的:观察NIPBL基因在细胞水平对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力产生的影响。方法:采用NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠构建NIPBL基因缺陷杂合子小鼠模型(NIPBL^+/-)并将其作为实验组,野生型(NIPBL^+/+)小鼠作为对照组。全骨髓贴壁法分离两组小鼠的骨髓间充质干细胞,培养到第3天倒置显微镜下对其细胞形态进行观察。为了鉴定细胞类型,细胞传至第3代时采用流式细胞仪检测细胞表面抗原表达。用CCK-8法对两组细胞增殖能力进行测定并比较,然后将细胞培养基更换为成骨诱导培养基后继续培养,用RT-PCR和Western Blot技术检测Runx2、OCN...

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【部分图文】：

图4实验组NIPBL+/-小鼠和对照组NIPBL+/+小鼠第3代骨髓间充质干细胞生长曲线

敲除NIPBL基因可下调小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力15相较于对照组，实验组细胞的增殖能力在前5天差异不大，在第6天以后对照组细胞增殖能力提高显著，而实验组提高则相对缓慢，见图4。在传代之后，两组细胞的生长曲线是基本一致，都“S”形态曲线。传代的前5天，细胞的生长速度非....

图6比较实验组NIPBL+/-小鼠和对照组NIPBL+/+小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导后碱性磷酸酶活性

图注：图A为对照组NIPBL+/+小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导培养7d；图B为实验组NIPBL+/-小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导培养基培养7d；图C为对照组NIPBL+/+小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导培养基培养14d；图D为实验组NIPBL+/....

图7实验组NIPBL+/-小鼠和对照组NIPBL+/+小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导后成骨相关基因表达

敲除NIPBL基因可下调小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力17Fig.6Comparisonofalkalinephosphataseactivityofbonemarrowmesenchymalstemcellsafterosteogenicinductionintheex....

图10a:NIPBL+/+;b:NIPBL+/-;c:NIPBL+/-+LiCL此外，神经系统异常也是CdLS的另一大显著特征，精准的研究CdLS患者的行为对其神经系统发育异常的机制阐明是也很重要的

??淙淮蟛糠侄?比野生型小鼠提取的细胞状态差，但也有约10%细胞出现基本无法生长的状况，这里或许对应着不同CdLS疾病患者症状的差异巨大。本实验后期，为了探索是否有药物能逆转NIPBL基因敲除降低的细胞增殖及成骨分化能力，本文作者尝试0.01ug/ml锂盐（氯化锂）加入NIPBL....

本文编号：3945622