黄瓜CsWRKY50基因的克隆与功能研究

发布时间：2024-04-02 20:27

　　黄瓜霜霉病是瓜类蔬菜生产中最具有毁灭性的世界性病害,造成了非常严重的损失,严重影响黄瓜的产量。因此,抗性基因的发掘和抗病机制的深入研究对黄瓜抗霜霉病的育种和生产实践具有重要意义。本文通过霜霉病的诱导及转录组数据分析,挖掘出了差异表达基因CsWRKY50。研究了该基因对黄瓜霜霉病的防御反应机理,以期丰富黄瓜霜霉病抗性机制的理论基础。主要研究结果如下:通过霜霉病菌诱导和转录组数据分析,鉴定出一个差异表达基因,经进化树和基因序列比对分析,明确了该基因结构及其他物种相关基因的亲缘关系。发现它和拟南芥的AtWRKY50同源性较高,命名该基因为CsWRKY50;亚细胞定位试验表明,该基因编码核定位蛋白。通过时空表达分析发现,该基因在雌花、叶、根中的表达量较高。实时荧光定量PCR技术检测显示,CsWRKY50的表达受逆境胁迫的诱导,干旱诱导下3h表达量开始升高,6 h达到最高;盐诱导下6 h表达量开始上升,12 h达到最高。其它激素MeJA、SA、ABA、BR处理下,1 h开始表达,后期表达都有相应的变化。结果表明CsWRKY50可能在黄瓜胁迫响应中发挥着重要的作用。对该基因进行黄瓜遗传转化,结果表...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1黄瓜WRKI-like基因编码蛋白质参与植物病原菌互作代谢通路Fig.lCucumberencodingARKY-likeproteinsinvolvedinplant-pathogeninteractionmetabolicpathway

3结果与分析3.1WRKY-like基因的获得与分析图1中显示：钙调蛋白激酶（CDPK）、氧化酶的同源基因（Rboh）、WRKY、MKK、PR1、JAZ、MYC2蛋白参与真菌PAMP、Ca2+、水杨酸、茉莉酸等信号的诱导和传递，这些基因的表达增强了黄瓜病原菌的识别系....

图2CaWRKIS0的基因结构和氨基酸多序列比对分析

黄瓜CsWRKY50基因的克隆与功能研究站和生物软件对该基因进行了比较系统的生物信息学分析。因结构和序列分析用NCBI数据库和黄瓜基因组网站，分析发现Csa6M363560.1的全，含有462bp的开放阅读框，13bp的5'非翻译区（UTR）和106R。这....

图3CsA72KY50蛋白与其它WRKY蛋白的进化关系分析

黄瓜CsWRKY50基因的克隆与功能研究烟草NtWRKY50。拟南芥中的这两个基因已被研究，它们参与丁香假单胞菌的介导防御，沉默该基因后，增强了植株对病害的敏感程度（Gaoetal.，2011）。据说这个亚族含有很多WRKYGQK七肽序列，这序列与本研究的结果一致（图....

图5CsWRKY50基因扩增产物（A）与酶切验证（B）M：DNA分子量标记DL2501Fig.5CsWRKY50geneamplification(A)andrestrictionenzyme(B)M:DNAMarkerDL2501

sWRKY50蛋白的亚细胞定位用PredictProtein（Rostetal.，2004）软件对CsWRKY50蛋白的亚细胞预测，预测结果说明该蛋白在细胞核中的概率为95.7%。为了验Y50蛋白亚细胞定位的预测结果，构建了35S:CsWRKY50-GFP的融体....

本文编号：3946160