核USP11稳定磷酸化的E2F1驱动Peg10基因表达和激活肺上皮细胞的研究

发布时间：2024-04-07 21:59

　　研究背景:肺上皮细胞再上皮化对ARDS的修复过程非常重要。磷酸化作用影响着转录因子的泛素化、稳定性及活性,从而调节了多种细胞功能。转录因子E2F1调节Peg10基因的表达,促进细胞的增殖。但是,E2F1的稳定性对Peg10表达的作用及磷酸化对E2F1稳定性的分子调节机制尚不清楚。USP11是一种DUBs,可以逆转多聚泛素化的蛋白底物,对于调节蛋白功能及信号转导具有重要意义。有研究指出去泛素化酶UCH37和POH1介导E2F1的去泛素化,增加E2F1的稳定性。本研究主要针对USP11对E2F1蛋白去泛素化及蛋白稳定性的影响,探讨USP11在肺损伤后修复中的作用机制。实验方法:[1]通过转染Usp11 Sh RNA质粒下调USP11后,采用Western Blot法和q RT-PCR方法测定PEG10的蛋白和m RNA水平。[2]通过转染E2f1 si RNA质粒下调E2F1或者转染Usp11 Sh RNA质粒下调USP11后通过转染HA-E2f1质粒过表达E2F1,采用Western Blot法和q RT-PCR方法测定PEG10蛋白和m RNA水平;通过转染Usp11 Sh RNA质粒...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第1章 文献综述
    1.1 急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的概述
        1.1.1 ALI/ARDS的现状
        1.1.2 病因
        1.1.3 发病机制
        1.1.4 诊断
        1.1.5 治疗
    1.2 肺泡上皮细胞损伤及修复对ARDS预后的影响
        1.2.1 肺泡上皮细胞损伤在ARDS中的作用
        1.2.2 肺泡上皮细胞在蛋白水肿液形成和清除中的作用
        1.2.3 肺泡上皮损伤机制
        1.2.4 肺泡上皮细胞完整性的维持、修复及重构
    1.3 泛素-蛋白酶体系统与蛋白质的降解
        1.3.1 泛素与泛素化
        1.3.2 蛋白酶体复合物
        1.3.3 去泛素化和去泛素化酶
    1.4 PEG10在细胞增殖移形中的作用
    1.5 转录因子E2F1对PEG10调节作用
    1.6 UPS对E2F1的调节作用
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系及培养条件
        2.1.2 主要试剂及来源
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 常用试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养和复苏
        2.2.2 Usp11Sh RNA慢病毒制备及转染
        2.2.3 细胞转染
        2.2.4 Westernblot方法测定目的蛋白浓度
        2.2.5 免疫沉淀反应
        2.2.6 细胞免疫荧光染色
        2.2.7 泛素分析
        2.2.8 实时荧光定量PCR进行目的基因m RNA检测
        2.2.9 细胞划痕实验
        2.2.10 电子细胞基质阻抗测定（ECIS）测量细胞增殖和迁移
    2.3 数据的获取及分析
        2.3.1 数据的获取
        2.3.2 统计分析
第3章 实验结果
    3.1 USP11调节Peg10的表达
    3.2 USP11通过增加转录因子E2F1的水平上调Peg10的表达
    3.3 USP11去泛素化和稳定E2F1
    3.4 核USP11对调节E2F1至关重要
    3.5 GSK3β介导E2F1的磷酸化促进E2F1的去泛素化和稳定性
    3.6 GSK3β促进E2F1和USP11相结合
    3.7 USP11通过稳定E2F1促进细胞增殖和迁移
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3948035